去甲腎上腺素誘導心肌細胞SP、CGRP的表達、心肌細胞凋亡及SP對心肌細胞凋亡影響的研究.pdf

1、目的:觀察去甲腎上腺素(norepinepherine,NE)誘導的心肌細胞P物質(SP)、降鈣素基因相關肽(CGRP)表達、心肌細胞凋亡，以及SP對心肌細胞凋亡的影響。 方法:(1)第一部分實驗選用1～3天齡的Sprague-Dawley(SD)大鼠建立新生大鼠心肌細胞體外培養(yǎng)模型，采用免疫細胞化學染色方法對心肌細胞進行鑒定：選用8孔培養(yǎng)第4～5天呈亞融合狀態(tài)下細胞隨機分為2組，每組4孔：1組為陰性對照組；2組為實驗組。

2、 (2)第二部分實驗選用20孔培養(yǎng)第4～5天呈亞融合狀態(tài)下細胞隨機分為5組，每組4孔：1組為對照組；2組為1h實驗組；3組為3h實驗組；4組為6h實驗組；5組為12h實驗組。2～5組所施加的NE終濃度均為10<'-8> mol/L。細胞培養(yǎng)基內分別加入NE共培后，取樣本進行測定。采用免疫細胞化學(IC)染色方法觀察NE誘導后心肌細胞內SP、CGRP表達水平的變化。 (3)第三部分實驗選用16孔培養(yǎng)第4～5天呈亞融合狀態(tài)下細胞隨

3、機分為4組，每組4孔：1組為對照組；2組為1h實驗組；3組為3h實驗組；4組為6h實驗組。2～4組所施加的NE終濃度均為10<'-8>mol/L。細胞培養(yǎng)基內分別加入NE共培后，取樣本進行測定。用tunel法觀察NE誘導后心肌細胞的捌亡。 (4)第四部分實驗選用12孔培養(yǎng)第4～5天呈亞融合狀態(tài)下細胞隨機分為3組，每組4孔：1組為對照組；2組為NE實驗組；3組為SP+NE組。2、3組NE的終濃度為10<'-8>mol/L，3組SP

4、終濃度為10<'-8>mol/L，與NE同時加入細胞培養(yǎng)基共培1小時后，取樣本進行測定。采用流式細胞術進行檢測，觀察SP對NE誘導后心肌細胞凋亡的影響。 結果:(1)培養(yǎng)細胞上清液中加入去甲腎上腺素(NE)進行誘導，1小時、3小時、6小時、12小時組NE均可誘導心肌細胞SP、CGRP表達水平較對照組顯著升高(p<0.05)，在10<'-8>mol/L、6小時達高峰。 (2)培養(yǎng)細胞上清液中加入NE(10<'-8>mol/

5、L)， 1小時、3小時、6小時均可誘導心肌細胞凋亡，較對照組顯著(p<0.05)，在1小時最為明顯。 (3)SP+NE組凋亡率明顯低于NE10<'-8>mol/L、1小時組(p<0.05)。 結論:(1)培養(yǎng)細胞上清中加入去甲腎上腺素可誘導心肌細胞SP、CGRP表達水平的增高。 (2)培養(yǎng)細胞上清中加入去甲腎上腺素可誘導心肌細胞凋亡。 (3)SP預先干預可顯著抑制去甲腎上腺素誘導的體外培養(yǎng)新生大鼠心肌細胞