去甲腎上腺素與CGRP對(duì)體外培養(yǎng)乳鼠心肌細(xì)胞αB——晶體蛋白表達(dá)的影響.pdf

1、目的：觀察去甲腎上腺素(Norepinephrine，NE)與降鈣素基因相關(guān)肽（Calcitonin gene-related peptide，CGRP）單獨(dú)使用，以及NE與CGRP混合使用對(duì)體外培養(yǎng)乳鼠心肌細(xì)胞αB-晶體蛋白(αB-crystallin，Cryab)表達(dá)的影響。
　　 方法：
　　 (1)乳鼠心肌細(xì)胞體外培養(yǎng)與鑒定。選用健康Wistar大鼠，1～3天齡，雌雄不拘，用于心肌細(xì)胞體外培養(yǎng)模型的建立。采用免疫

2、細(xì)胞化學(xué)SABC法對(duì)所培養(yǎng)的心肌細(xì)胞進(jìn)行鑒定。
　　 (2) NE對(duì)體外培養(yǎng)乳鼠心肌細(xì)胞αB-晶體蛋白表達(dá)的影響。取16孔心肌細(xì)胞，將其隨機(jī)分為四組，每組4孔(n=4)。C組，對(duì)照組;NE8組(10-8mol/L);NE7組（10-7mol/L）;NE6組(10-6mol/L)。各組給藥作用1h后采用Western blot技術(shù)檢測(cè)αB-晶體蛋白表達(dá)量。另取3孔心肌細(xì)胞采用免疫熒光雙標(biāo)法對(duì)心肌細(xì)胞中αB-晶體蛋白進(jìn)行定位檢測(cè)。<

3、br>　　 (3) CGRP對(duì)體外培養(yǎng)乳鼠心肌細(xì)胞αB-晶體蛋白表達(dá)的影響。取24孔心肌細(xì)胞，將其隨機(jī)分為六組，每組4孔(n=4)。C組;CGRP11組(10-11mol/L);CGRP10組(10-10mol/L); CGRP9組(10-9mol/L);CGRP8組(10-8mol/L);CGRP7組（10-7mol/L）。各組給藥作用1h后采用Western blot技術(shù)檢測(cè)αB-晶狀體蛋白表達(dá)量。
　　 (4) NE與C

4、GRP混合對(duì)體外培養(yǎng)乳鼠心肌細(xì)胞αB-晶體蛋白表達(dá)的影響。取16孔心肌細(xì)胞，將其隨機(jī)分為四組，每組4孔(n=4)。C組;NE組(10-6mol/L);NC組（10-6mol/L NE和10-10mol/L CGRP）;NC8組(10-6mol/L NE、10-10mol/LCGRP和10-9mol/L CGRP8-37）。各組給藥作用1h后采用Western blot技術(shù)檢測(cè)αB-晶體蛋白表達(dá)量。
　　 (5) NE與CGRP混

5、合對(duì)體外培養(yǎng)乳鼠心肌細(xì)胞αB-晶體蛋白mRNA表達(dá)的影響。取15孔心肌細(xì)胞，將其隨機(jī)分為五組，每組3孔(n=3)。C組;NE組(10-6mol/L); NC組（10-6mol/L NE和10-10mol/L CGRP）;NC8組(10-6mol/LNE、10-10mol/L CGRP和10-9mol/L CGRP8-37);CGRP組(10-10mol/L)。各組給藥作用1h后采用Rt-PCR技術(shù)檢測(cè)αB-晶體蛋白mRNA表達(dá)量。

6、>　　 結(jié)果：
　　 (1)乳鼠心肌細(xì)胞體外培養(yǎng)成功，經(jīng)檢測(cè)，心肌細(xì)胞占所培養(yǎng)細(xì)胞總數(shù)的90％以上。
　　 (2)正常心肌細(xì)胞中存在大量αB-晶體蛋白;且αB-晶體蛋白在心肌中主要分布于細(xì)胞核周?chē)?，在?xì)胞質(zhì)中亦有大量分布。
　　 (3)與對(duì)照組（C組）比較，NE8組、NE7組、NE6組三組中Cryab的表達(dá)量均出現(xiàn)下調(diào)，且以NE6組下調(diào)作用最明顯(P＜0.01)。
　　 (4)與對(duì)照組（C組）比較，CG

7、RP11組、CGRP10組、CGRP9組、CGRP8組、CGRP7組五組中Cryab的表達(dá)量均出現(xiàn)上調(diào)，且這五組與C組之間的差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)。并以CGRP10組作用最明顯(P＜0.01)。
　　 (5)與對(duì)照組（C組）比較，NE組Cryab的表達(dá)出現(xiàn)了明顯下降(P＜0.01);與NE組比較，NC組Cryab的表達(dá)出現(xiàn)了明顯上調(diào)(P＜0.05);與NC組比較，NC8組Cryab的表達(dá)有一定的下調(diào)趨勢(shì)，但不明顯（

8、P＞0.05）。
　　 (6)與對(duì)照組（C組）比較，NE組、NC組、NC8組和CGRP組Cryab mRNA的表達(dá)均出現(xiàn)了下調(diào)，且以NE組、NC組最明顯（P＜0.05）;與NE組比較，NC組Cryab mRNA的表達(dá)出現(xiàn)了輕微上調(diào)，但不明顯(P＞0.05);與NC組比較，NC8組Cryab mRNA的表達(dá)出現(xiàn)了輕微上調(diào)，但不明顯，(P＞0.05)。
　　 結(jié)論：
　　 (1) NE可抑制體外培養(yǎng)心肌細(xì)胞Cryab