不同葡萄糖濃度培養(yǎng)基對(duì)原代乳鼠心肌細(xì)胞影響的研究.pdf

1、乳鼠心肌細(xì)胞人工體外培養(yǎng)技術(shù)由Harary在1960年創(chuàng)立，經(jīng)過(guò)半個(gè)多世紀(jì)的發(fā)展，現(xiàn)已成為心血管研究領(lǐng)域一門十分重要的成熟的基礎(chǔ)技術(shù)，廣泛應(yīng)用于心肌生理、心肌肥大、心肌缺血/再灌注損傷、心肌再生等研究。葡萄糖作為乳鼠心肌細(xì)胞培養(yǎng)基的主要成分之一，對(duì)心肌細(xì)胞的生長(zhǎng)、增殖和功能狀態(tài)維持等都具有重大影響。內(nèi)質(zhì)網(wǎng)是細(xì)胞內(nèi)負(fù)責(zé)蛋白質(zhì)合成、轉(zhuǎn)運(yùn)、修飾和正確折疊等生理功能的細(xì)胞器，對(duì)細(xì)胞和機(jī)體至關(guān)重要。然而，當(dāng)內(nèi)質(zhì)網(wǎng)受某些因素影響導(dǎo)致未折疊或錯(cuò)誤折疊

2、蛋白蓄積時(shí)，將引起內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激(endoplasmicreticulumstress，ERS)。研究發(fā)現(xiàn)，ERS參與了許多疾病的發(fā)生，如肥胖、糖尿病、腫瘤和心肌肥大、心肌缺血/再灌注損傷等，還可能與糖尿病心肌病有關(guān)。葡萄糖調(diào)節(jié)蛋白78(glucoseregulatedprotein78，GRP78)是應(yīng)激誘導(dǎo)的內(nèi)質(zhì)網(wǎng)預(yù)留蛋白，是維持內(nèi)質(zhì)網(wǎng)穩(wěn)態(tài)的重要調(diào)節(jié)劑，也是內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激的經(jīng)典標(biāo)志物。本實(shí)驗(yàn)通過(guò)觀測(cè)細(xì)胞形態(tài)學(xué)及活性的改變、GRP78在蛋白及

3、基因水平表達(dá)量的變化，并以衣霉素處理組作為陽(yáng)性對(duì)照，探討不同葡萄糖濃度培養(yǎng)基對(duì)原代乳鼠心肌細(xì)胞的影響關(guān)系。
　　目的:通過(guò)觀察原代乳鼠心肌細(xì)胞在不同葡萄糖濃度培養(yǎng)基作用下細(xì)胞形態(tài)學(xué)、活性以及內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激的情況，以探討葡萄糖對(duì)原代乳鼠心肌細(xì)胞的影響關(guān)系。
　　方法:使用不同葡萄糖濃度的培養(yǎng)基（葡萄糖濃度分別為5.6mmol/L（低糖）、11.1mmol/L（中糖）、25mmol/L（高糖））原代培養(yǎng)乳鼠心肌細(xì)胞;以加入1mg/L

4、或5mg/L衣霉素孵育心肌細(xì)胞6h、12h或24h作為陽(yáng)性對(duì)照。然后對(duì)各實(shí)驗(yàn)分組在高倍倒置相差顯微鏡下觀察心肌細(xì)胞形態(tài)及搏動(dòng)狀況，CCK-8法檢測(cè)細(xì)胞活性，HE染色后觀察細(xì)胞形態(tài)變化，并用Westernblot法、RT-PCR法檢測(cè)GRP78的表達(dá)水平。
　　結(jié)果:高糖培養(yǎng)基及中糖培養(yǎng)基組乳鼠心肌細(xì)胞明顯較低糖培養(yǎng)基組生長(zhǎng)更旺盛、增殖數(shù)量更多、伸出偽足更多、形態(tài)學(xué)評(píng)分更高、搏動(dòng)頻率更高、細(xì)胞活性更好(p＜0.01)，高糖培養(yǎng)基組與