離體培養(yǎng)乳鼠心肌細(xì)胞時間生物學(xué)機制探討.pdf

1、視交叉上核(SCN)是哺乳動物腦內(nèi)調(diào)節(jié)體內(nèi)自激振蕩節(jié)律的主要振蕩器.該課題以離體培養(yǎng)的心肌細(xì)胞作為研究對象,分三個部分逐步對其生物節(jié)律調(diào)節(jié)機制進行研究.首先我們將研究中樞神經(jīng)系統(tǒng)活動節(jié)律的探針,苯二氮卓類藥物安定和苯二氮卓受體內(nèi)源性調(diào)節(jié)因子、時間保持激素褪黑素分別以10<'-8>mol/L,10<'-6>mol/L,10<'-4>mol/L三種濃度對體外培養(yǎng)的搏動的心肌細(xì)胞進行干預(yù),采用針對心肌細(xì)胞運動特點而設(shè)計的圖象分析軟件,對心肌細(xì)

2、胞運動進行定量分析的電子成像技術(shù)在24h六個時間點(當(dāng)?shù)貢r間)00:00,04:00,08:00,12:00,16:00,20:00對離體培養(yǎng)的收縮心肌細(xì)胞的搏動頻率進行動態(tài)監(jiān)測,用時間生物學(xué)單余弦法分析其生物節(jié)律變化情況.其次再用褪黑素對離體培養(yǎng)的心肌細(xì)胞進行干預(yù),用免疫細(xì)胞化學(xué)方法檢測心肌細(xì)胞內(nèi)mper1基因所編碼的蛋白的表達.最后采用DNA克隆技術(shù)對抗特異基因的核酶DNA進行克隆,核酶DNA再經(jīng)體外轉(zhuǎn)錄成小片段RNA核酶,用小片段

3、RNA核酶瞬時轉(zhuǎn)染離體培養(yǎng)的心肌細(xì)胞,用分子生物學(xué)技術(shù)(RT-PCR,Western blot)檢測心肌細(xì)胞內(nèi)的mper1基因mRNA及其所編碼的mper1基因蛋白的表達.因而得出結(jié)論:褪黑素及安定作為內(nèi)源性授時因子可以導(dǎo)引離體心肌細(xì)胞搏動的近日節(jié)律;心肌細(xì)胞內(nèi)mper1基因蛋白表達的近日節(jié)律能被褪黑素所導(dǎo)引;核酶可以阻斷離體心肌細(xì)胞內(nèi)mper1基因mRNA及mper1基因蛋白的表達;核酶可以使心肌細(xì)胞搏動的近日節(jié)律消失.由此證明mpe