不同葡萄糖濃度對乳鼠心肌細胞培養(yǎng)中自噬的影響.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、目的：觀察不同葡萄糖濃度對乳鼠心肌細胞培養(yǎng)中自噬的影響
　　 方法：體外培養(yǎng)乳鼠心肌細胞，用0.125％胰蛋白酶分離乳鼠心室肌細胞，并用差速貼壁分離法和5-溴脫氧尿嘧啶(Brdu)純化心肌細胞；培養(yǎng)24小時后，進行分組。分四組如下：L組：即對照組，葡萄糖(5.5mmol/L)培養(yǎng)的心肌細胞；H組：即高糖組，葡萄糖(25mmol/L)培養(yǎng)的心肌細胞；LR組：即對照+自噬誘導劑組(雷帕霉素100nm/L)；HR組：即高糖+自噬誘導劑

2、組(雷帕霉素100nm/L)。通過光鏡觀察和鑒定心肌細胞，計算各組心肌細胞面積；用RT-PCR檢測心肌肥大標記基因[ANP(atrial natriuretic peptid，心房利鈉肽)、β-MHC(β-myosin heavy chain，β-肌球蛋白重鏈)]和自噬相關基因(Beclin-1)表達情況；運用Western blotting檢測自噬標記性蛋白微管相關蛋白3(LC-3)的表達，并比較不同葡萄糖濃度下自噬水平的差異。采用B

3、andscan5.0對PCR條帶進行光密度測定，采用Sigma Scan Pro5軟件對Westernblotting印跡條帶進行光密度測定。所有數(shù)據(jù)采用SSPS17.0統(tǒng)計軟件進行統(tǒng)計分析，P<0.05為有統(tǒng)計學意義。
　　 結果：心肌細胞面積檢測、RT-PCR及Western blotting結果均顯示：
　　 1、高糖組心肌細胞肥大相關指標(心肌細胞面積、ANP和β-MHC基因表達)較對照組升高，差異有統(tǒng)計學意義(

4、P<0.05)；高糖組自噬相關指標(beclin-1基因表達和LC-3表達)較對照組減低，差異有統(tǒng)計學意義。
　　 2、高糖+自噬誘導劑組心肌細胞肥大相關指標較對照+自噬誘導劑組升高，但差異無統(tǒng)計學意義；高糖+自噬誘導劑組自噬相關指標較對照+自噬誘導劑組減低，但差異無統(tǒng)計學意義。
　　 3、高糖+自噬誘導劑組心肌細胞肥大相關指標較高糖組減低，差異有統(tǒng)計學意義；高糖+自噬誘導劑組自噬相關指標較高糖組升高，差異有統(tǒng)計學意義。

5、
　　 4、對照+自噬誘導劑組的心肌細胞肥大相關指標較對照組減低，但差異無統(tǒng)計學意義；對照+自噬誘導劑組的自噬相關指標較對照組升高，但差異無統(tǒng)計學意義。
　　 結論：
　　 1、培養(yǎng)基中葡萄糖濃度升高可導致心肌細胞肥大，同時合并有心肌細胞自噬水平的下降。
　　 2、在高糖培養(yǎng)基中加入自噬誘導劑可升高心肌細胞的自噬水平，同時抑制高糖導致心肌細胞肥大效果。
　　 3、培養(yǎng)基中葡萄糖濃度升高導致心肌細胞

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