金屬硫蛋白對(duì)TGF-β1誘導(dǎo)成纖維細(xì)胞增殖的調(diào)控及氧化苦參堿的干預(yù)作用.pdf

1、隨著社會(huì)人口的老齡化，心血管疾病已成為嚴(yán)重威脅人類健康的主要疾病。而多種心血管疾病都與心肌纖維化(MF)——心肌成纖維細(xì)胞(CFs)增殖有著密切的關(guān)系。轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-β1(TGF-β1)功能異常是多種導(dǎo)致MF因素的最后共同通路，而TGF-β/Smads信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路是TGF-β1發(fā)揮生物學(xué)作用的主要信號(hào)系統(tǒng)。因此，干預(yù)TGF-β1信號(hào)通路，對(duì)預(yù)防MF具有重要意義。本研究以TGF-β/Smads信號(hào)通路為作用靶點(diǎn)，觀察金屬硫蛋白(MT)對(duì)M

2、F的調(diào)控作用及及氧化苦參堿(OMT)的干預(yù)作用。
　　第一部分 MT對(duì)體外培養(yǎng)CFs中TGF-β1信號(hào)通路的調(diào)控作用
　　目的:研究MT在MF過程中對(duì)TGF-β1信號(hào)系統(tǒng)的調(diào)控作用，為以MT為干預(yù)靶位的MF的防治提供實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)與理論依據(jù)。
　　方法:傳代培養(yǎng)CFs，以MTT法確定TGF-β1及MT+TGF-β1作用的最適濃度;正式實(shí)驗(yàn)分為對(duì)照組、TGF-β1組(20ng·ml-1)、TGF-β1(20ng·ml-1)+M

3、T高劑量(20ng·ml-1)組、TGF-β1(20ng·ml-1)+MT低劑量(10ng·ml-1)組;用Giemsa染色法觀察細(xì)胞形態(tài);免疫細(xì)胞化學(xué)法檢測(cè)Ⅰ型膠原、Ⅲ型膠原及Smad2/3的表達(dá)。
　　結(jié)果:TGF-β1在20ng·ml-1作用24h時(shí)細(xì)胞存活率為198％，其A570與對(duì)照組比較P＜0.01，促進(jìn)CFs增殖;TGF-β1(20ng·ml-1)+MT(20ng·ml-1)組及TGF-β1(20ng·ml-1)+M

4、T10(ng·ml-1)組細(xì)胞存活率為75.56％和80.00％，顯著低于TGF-β1組(P＜0.01、P＜0.01);Giemsa染色結(jié)果顯示TGF-β1組細(xì)胞分裂指數(shù)為0.59％，與對(duì)照組(0.31％)比較P＜0.01;TGF-β1+MT各劑量組細(xì)胞分裂指數(shù)(0.28％、0.20％)與TGF-β1組比較P＜0.01、P＜0.01;免疫細(xì)胞化學(xué)結(jié)果顯示TGF-β1能顯著提高CFs中colⅠ、colⅢ及Smad2/3的表達(dá)，平均光密度值

5、與對(duì)照組比較P＜0.01; TGF-β1+ MT各劑量組細(xì)胞平均光密度值顯著低于TGF-β1組（P＜0.01、P＜0.01）。
　　結(jié)論:MT能抑制TGF-β1誘導(dǎo)的CFs增殖，其機(jī)制與調(diào)控TGF-β/Smads信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路、抑制CFs中colⅠ、colⅢ表達(dá)有關(guān)。
　　第二部分 OMT對(duì)體外培養(yǎng)CFs中TGF-β1信號(hào)通路的干預(yù)作用
　　目的:研究OMT在MF過程中對(duì)TGF-β1信號(hào)系統(tǒng)的干預(yù)作用，為OMT防治MF提

6、供試驗(yàn)基礎(chǔ)與理論依據(jù)。
　　方法:傳代培養(yǎng)CFs，以MTT法確定TGF-β1(20 ng·ml-1)+OMT作用的最適濃度;正式試驗(yàn)分為對(duì)照組、TGF-β1(20ng·ml-1)組、TGF-β1(20ng·ml-1)+ OMT高劑量(2mg·ml-1)組、TGF-β1(20ng·ml-1)+OMT中劑量(1mg·ml-1)組、TGF-β1(20ng·ml-1)+OMT低劑量(0.5mg·ml-1)組;用Giemsa染色法觀察細(xì)胞形

7、態(tài);以免疫細(xì)胞化學(xué)法檢測(cè)Ⅰ型膠原、Ⅲ型膠原及Smad2/3的表達(dá)。
　　結(jié)果:TGF-β1(20ng·ml-1)+OMT2mg·ml-1、1mg·ml-1、及0.5mg·ml-1時(shí)細(xì)胞存活率分別為78.17％、83.63％、89.09％，顯著低于TGF-β1組（P＜0.01、P＜0.01、P＜0.05）;Giemsa染色結(jié)果顯示TGF-β1+OMT各劑量組細(xì)胞分裂指數(shù)(0.27％、0.25％、0.30％)，顯著低于TGF-β1組(

8、P＜0.01、P＜0.01、P＜0.01);免疫細(xì)胞化學(xué)結(jié)果顯示TGF-β1+OMT各劑量組能顯著降低TGF-β1誘導(dǎo)的CFs中colⅠ、colⅢ的表達(dá)，平均光密度值顯著低于TGF-β1組（P＜0.01、P＜0.01、P＜0.01）;并能顯著降低Smad2/3的表達(dá)，平均光密度值顯著低于TGF-β1組（P＜0.01、P＜0.01、P＜0.05）。
　　結(jié)論:OMT能抑制TGF-β1誘導(dǎo)的細(xì)胞增殖，其作用機(jī)制與干預(yù)TGF-β/Sma