TGF-β1在應(yīng)力介導(dǎo)的牙周膜成纖維細(xì)胞增殖中的作用及其機(jī)制.pdf

1、目的：
　　 牙周炎的致病因素復(fù)雜,并受全身防御機(jī)制的調(diào)控和各種局部因素的影響。牙合創(chuàng)傷作為牙周炎的局部促進(jìn)因素可加重牙周病的進(jìn)展,因此,明確應(yīng)力在牙周組織適應(yīng)性改建中的作用機(jī)制對(duì)于牙周炎病因病理機(jī)制的研究具有重要意義。目前研究認(rèn)為,TGF-β1不僅參與了牙周組織的發(fā)育、牙齒移動(dòng)、牙周炎癥、免疫調(diào)節(jié)及牙周組織再生等一系列生理病理過程,還對(duì)牙周膜間隙的維持、牙周膜細(xì)胞的分化和增殖,細(xì)胞外基質(zhì)的合成及降解等起重要的調(diào)控作用。然而,這

2、種細(xì)胞因子在應(yīng)力介導(dǎo)的HPDLF增殖中的生物學(xué)變化規(guī)律及其調(diào)節(jié)機(jī)制尚未得出明確結(jié)論。本研究擬在成功構(gòu)建牙周膜成纖維細(xì)胞體外培養(yǎng)-力學(xué)刺激模型的基礎(chǔ)上,研究周期性張應(yīng)力對(duì)HPDLF增殖的作用,探討TGF-β1的表達(dá)與HPDLF增殖之間的關(guān)系,明確周期性張應(yīng)力介導(dǎo)的TGF-β1對(duì)HPDLFⅠ型膠原mRNA表達(dá)的影響。本課題有望揭示周期性張應(yīng)力介導(dǎo)的牙周膜適應(yīng)性改建的分子機(jī)制,為深入研究咬合創(chuàng)傷的致病機(jī)理與牙周炎的關(guān)系提供理論依據(jù),為咬合創(chuàng)傷

3、及牙周炎基因治療關(guān)鍵靶點(diǎn)的篩選提供實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。
　　 方法：
　　 本實(shí)驗(yàn)以體外培養(yǎng)的人牙周膜成纖維細(xì)胞為研究對(duì)象,利用多通道細(xì)胞牽張應(yīng)力加載系統(tǒng),構(gòu)建人牙周膜成纖維細(xì)胞體外培養(yǎng)-力學(xué)刺激模型。實(shí)驗(yàn)組分為施加周期性張應(yīng)力(加力幅度為10％,頻率為0.1Hz)2h組、6h組、12h組、24h組,以不加力組(0h)為對(duì)照組,觀察各組細(xì)胞形態(tài)變化;利用CCK-8檢測(cè)細(xì)胞增殖活性;利用ELISA檢測(cè)各組TGF-β1的表達(dá);并應(yīng)用T

4、GF-β1特異性抑制劑SB431542,利用RT-PCR檢測(cè)技術(shù)檢測(cè)周期性張應(yīng)力作用下TGF-β1對(duì)Ⅰ型膠原基因表達(dá)的影響。采用SPSS17.0統(tǒng)計(jì)分析軟件對(duì)檢測(cè)結(jié)果進(jìn)行分析,P＜0.05表明差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　 結(jié)果：
　　 1.隨加力時(shí)間的延長(zhǎng),加力板彈性基底膜上各組細(xì)胞均無(wú)脫落,生長(zhǎng)狀態(tài)良好;各實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞形態(tài)發(fā)生顯著變化,細(xì)胞呈長(zhǎng)梭形,并有方向上的一致性。
　　 2.與對(duì)照組相比,細(xì)胞增殖隨加力時(shí)間變化

5、而變化,CCK-8檢測(cè)各組D450差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05),組間比較通過LSD統(tǒng)計(jì)方法差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05),分別表明2h細(xì)胞與對(duì)照組比較增殖降低,6h增殖活性增強(qiáng),12h達(dá)到本次實(shí)驗(yàn)的峰值,24h增殖活性明顯降低。
　　 3.ELISA檢測(cè)結(jié)果顯示,隨加力時(shí)間的延長(zhǎng),與對(duì)照組相比,TGF-β1在2h表達(dá)變化不明顯(P＞0.05),6h表達(dá)活性增強(qiáng),12h達(dá)到本次實(shí)驗(yàn)的峰值(P＜0.05),24h表達(dá)活性明顯降

6、低(P＜0.05),其變化趨勢(shì)同加力后細(xì)胞增殖的變化;加入抑制劑的對(duì)照組和12h組分別與不加抑制劑的該兩組相比,CCK-8檢測(cè)細(xì)胞增殖受到抑制,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05),表明TGF-β1受到抑制后細(xì)胞增殖受到抑制;可以推測(cè)TGF-β1參與周期性張應(yīng)力作用下HPDLF的增殖。
　　 4.RT-PCR測(cè)定結(jié)果顯示,各實(shí)驗(yàn)組灰度值與對(duì)照組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05),表明隨加力時(shí)間的延長(zhǎng),Ⅰ型膠原的表達(dá)隨TGF-β1

7、表達(dá)的增強(qiáng)而增強(qiáng),也與細(xì)胞增殖成正相關(guān)關(guān)系。
　　 結(jié)論：
　　 1.成功構(gòu)建人牙周膜成纖維細(xì)胞體外培養(yǎng)-力學(xué)刺激模型。
　　 2.在一定時(shí)間內(nèi),一定的周期性張應(yīng)力(加力幅度為10％,頻率為0.1 Hz)加載可促進(jìn)人牙周膜成纖維細(xì)胞的增殖,加力時(shí)間過長(zhǎng)這種促進(jìn)增殖的能力可受到抑制。
　　 3.TGF-β1參與并促進(jìn)了周期性張應(yīng)力介導(dǎo)的人牙周膜成纖維細(xì)胞的增殖。
　　 4.在周期性張應(yīng)力作用下,TG