TGF-β1在應力介導的牙周膜成纖維細胞增殖中的作用及其機制.pdf

1、目的：
　　 牙周炎的致病因素復雜,并受全身防御機制的調控和各種局部因素的影響。牙合創(chuàng)傷作為牙周炎的局部促進因素可加重牙周病的進展,因此,明確應力在牙周組織適應性改建中的作用機制對于牙周炎病因病理機制的研究具有重要意義。目前研究認為,TGF-β1不僅參與了牙周組織的發(fā)育、牙齒移動、牙周炎癥、免疫調節(jié)及牙周組織再生等一系列生理病理過程,還對牙周膜間隙的維持、牙周膜細胞的分化和增殖,細胞外基質的合成及降解等起重要的調控作用。然而,這

2、種細胞因子在應力介導的HPDLF增殖中的生物學變化規(guī)律及其調節(jié)機制尚未得出明確結論。本研究擬在成功構建牙周膜成纖維細胞體外培養(yǎng)-力學刺激模型的基礎上,研究周期性張應力對HPDLF增殖的作用,探討TGF-β1的表達與HPDLF增殖之間的關系,明確周期性張應力介導的TGF-β1對HPDLFⅠ型膠原mRNA表達的影響。本課題有望揭示周期性張應力介導的牙周膜適應性改建的分子機制,為深入研究咬合創(chuàng)傷的致病機理與牙周炎的關系提供理論依據(jù),為咬合創(chuàng)傷

3、及牙周炎基因治療關鍵靶點的篩選提供實驗基礎。
　　 方法：
　　 本實驗以體外培養(yǎng)的人牙周膜成纖維細胞為研究對象,利用多通道細胞牽張應力加載系統(tǒng),構建人牙周膜成纖維細胞體外培養(yǎng)-力學刺激模型。實驗組分為施加周期性張應力(加力幅度為10％,頻率為0.1Hz)2h組、6h組、12h組、24h組,以不加力組(0h)為對照組,觀察各組細胞形態(tài)變化;利用CCK-8檢測細胞增殖活性;利用ELISA檢測各組TGF-β1的表達;并應用T

4、GF-β1特異性抑制劑SB431542,利用RT-PCR檢測技術檢測周期性張應力作用下TGF-β1對Ⅰ型膠原基因表達的影響。采用SPSS17.0統(tǒng)計分析軟件對檢測結果進行分析,P＜0.05表明差異有統(tǒng)計學意義。
　　 結果：
　　 1.隨加力時間的延長,加力板彈性基底膜上各組細胞均無脫落,生長狀態(tài)良好;各實驗組細胞形態(tài)發(fā)生顯著變化,細胞呈長梭形,并有方向上的一致性。
　　 2.與對照組相比,細胞增殖隨加力時間變化

5、而變化,CCK-8檢測各組D450差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05),組間比較通過LSD統(tǒng)計方法差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05),分別表明2h細胞與對照組比較增殖降低,6h增殖活性增強,12h達到本次實驗的峰值,24h增殖活性明顯降低。
　　 3.ELISA檢測結果顯示,隨加力時間的延長,與對照組相比,TGF-β1在2h表達變化不明顯(P＞0.05),6h表達活性增強,12h達到本次實驗的峰值(P＜0.05),24h表達活性明顯降

6、低(P＜0.05),其變化趨勢同加力后細胞增殖的變化;加入抑制劑的對照組和12h組分別與不加抑制劑的該兩組相比,CCK-8檢測細胞增殖受到抑制,差異均有統(tǒng)計學意義(P＜0.05),表明TGF-β1受到抑制后細胞增殖受到抑制;可以推測TGF-β1參與周期性張應力作用下HPDLF的增殖。
　　 4.RT-PCR測定結果顯示,各實驗組灰度值與對照組比較差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05),表明隨加力時間的延長,Ⅰ型膠原的表達隨TGF-β1

7、表達的增強而增強,也與細胞增殖成正相關關系。
　　 結論：
　　 1.成功構建人牙周膜成纖維細胞體外培養(yǎng)-力學刺激模型。
　　 2.在一定時間內,一定的周期性張應力(加力幅度為10％,頻率為0.1 Hz)加載可促進人牙周膜成纖維細胞的增殖,加力時間過長這種促進增殖的能力可受到抑制。
　　 3.TGF-β1參與并促進了周期性張應力介導的人牙周膜成纖維細胞的增殖。
　　 4.在周期性張應力作用下,TG