干擾素-γ對瘢痕成纖維細胞TGF-β-Smad信號通路的作用和機制研究.pdf

1、【研究背景】：：
　　病理性瘢痕包括增生性瘢痕和瘢痕疙瘩。它們的共同特點是以膠原為主的細胞外基質(zhì)（ECM）代謝紊亂，導致細胞外基質(zhì)大量異常沉積，造成患者外觀畸形和功能障礙。研究表明，TGF-β是導致瘢痕形成的重要細胞因子，它主要通過TGF-β/Smad信號通路參與調(diào)節(jié)成纖維細胞的增殖，凋亡，轉(zhuǎn)分化和膠原代謝。IFN-γ是細胞因子類藥物，具有抗病毒，抗腫瘤和免疫調(diào)節(jié)的功能。除此之外，研究表明它還可以用于治療纖維化疾病如肝纖維化，肺纖

2、維化，病理性瘢痕和系統(tǒng)性硬化。但是，IFN-γ抗纖維化的具體機制如何，尤其是它對病理性瘢痕成纖維細胞TGF-β/Smad信號通路的作用和機制如何，尚未見明確報道。
　　【研究目的】
　　1.觀察在病理性瘢痕成纖維細胞中，IFN-γ對TGF-β1誘導的α-SMA，MMP1，TIMP1，CTGF作用，闡明IFN-γ抗纖維化的機制。
　　2.明確IFN-γ不同作用時間和濃度時對瘢痕成纖維細胞中Smad3，Smad7表達水平的

3、影響，初步探討其作用機制。
　　【研究內(nèi)容】：
　　1.IFN-γ對瘢痕成纖維細胞中CTGF表達的影響：分別采用實時定量PCR和蛋白印跡的方法檢測CTGF的基因和蛋白水平。
　　2.IFN-γ對TGF-β1誘導后α-SMA，MMP1，TIMP1表達的影響：采用免疫熒光細胞化學和蛋白印跡的方法檢測α-SMA的表達，采用實時熒光定量PCR的方法檢測MMP1和TIMP1的表達。
　　3.IFN-γ不同作用時間和作用濃度

4、對瘢痕成纖維細胞中Smad3和Smad7表達的影響：分別采用實時定量PCR和蛋白印跡的方法檢測Smad3和Smad7的基因和蛋白水平。
　　4.構(gòu)建YB-1的過表達載體和shRNA載體。
　　【研究結(jié)果】：：
　　1.IFN-γ可以下調(diào)基礎狀態(tài)下CTGF的表達量，還可以顯著拮抗由TGF-β1刺激引起的CTGF表達的上調(diào)。
　　2.IFN-γ可以降低瘢痕成纖維細胞中α-SMA的表達量，還可以抑制由TGF-β1引起的

5、α-SMA表達量的上調(diào)；IFN-γ單獨作用對MMP1和TIMP1均無明顯作用，但與TGF-β1聯(lián)合作用時，可以拮抗TGF-β1對MMP1和TIMP1表達的影響。
　　3.IFN-γ作用后可以降低Smad3的表達量，同時升高Smad7的表達量，這種作用是通過抑制或刺激基因轉(zhuǎn)錄來實現(xiàn)的，而且呈時間和劑量依賴效應。
　　4.成功構(gòu)建YB-1的過表達載體和shRNA載體。
　　【研究結(jié)論】
　　1.IFN-γ可以拮抗由T