積雪草苷對增生性瘢痕成纖維細胞TGF-β-Smads信號通路的影響.pdf

1、積雪草苷是從傳統(tǒng)中草藥傘形植物積雪草中提取出來的有效物質(zhì),它通過抑制Fb增殖,控制結(jié)締組織的基質(zhì)和纖維成分的過度增生,減少HS中TGF-β的水平,發(fā)揮抑制瘢痕增生的作用.HS中TGF-β 1與TGF-β 2含量增高,與正常皮膚中的Fb相比,體外培養(yǎng)的HSFb對TGF-β的反應(yīng)性更高,Smad是TGF-β的下游信號蛋白,因此我們推測Smad信號通路在細胞內(nèi)異常持續(xù)激活,和/或細胞內(nèi)抑制作用減弱是其原因.磷酸化Smad2和Smad7是細胞內(nèi)

2、兩種重要的作用相反的信號介導(dǎo)子,且磷酸化是Smad2活化形式.目的:1、HSFb中TGF-β/Smads信號通路中的Smad2、7信號介導(dǎo)子的表達及調(diào)控,探討HS中是否存在TGF-β/Smads信號通路的異常.2、觀察積雪草苷對HSFb中TGF-β/Smads信號通路中smad2、Smad7表達的影響,探討其抑制瘢痕增生的作用是否與此有關(guān).方法:1、實驗第一部分:Fb的培養(yǎng).取術(shù)中切除的HS組織6例,瘢痕增生的時間在3個月~8個月,經(jīng)H

3、E及Masson染色證實為增生性瘢痕.6例健康人的正常皮膚標(biāo)本為對照.以組織塊法進行人HS和NFb的原代培養(yǎng),取第2-4代用于實驗.2、實驗第二部分:HSFb中TGF-β/Smads信號通路的表達及調(diào)控.將5ng/ml濃度的TGF-β 1作用于HS及NFb,分別在0,30分鐘,1小時,2小時,4小時及24小時進行如下檢測.①應(yīng)用免疫細胞化學(xué)檢測磷酸化Smad2和Smad7在細胞內(nèi)的定位.②RT-PCR檢測Smad2和Smad7 mRNA

4、的表達水平.③Western Blot測定磷酸化Smad2和Smad7的蛋白表達量.比較靜息及加入TGF-β 1后各時間點之間,各項指標(biāo)在HS與NFb之間的差異,P<0.05認為差異有統(tǒng)計學(xué)意義.3、實驗的第三部分:積雪草苷對HSFb中TGF-β/Smads信號通路的影響將積雪草苷加入HSFb中48小時后,在加藥前后應(yīng)用以下方法進行檢測.①流式細胞儀檢測細胞周期及凋亡②應(yīng)用免疫細胞化學(xué)檢測磷酸化Smad2和Smad7在細胞內(nèi)的定位.③R