慢病毒介導(dǎo)hIL-24基因?qū)︸：鄹泶癯衫w維細(xì)胞TGFβ1信號通路的影響.pdf

1、目的：本課題組前期實(shí)驗(yàn)證實(shí)hIL-24可抑制瘢痕疙瘩侵襲性生長、促進(jìn)其細(xì)胞凋亡，但其作用機(jī)理尚不清楚。本研究擬在前期工作基礎(chǔ)上，從信號轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑初步探討hIL-24可能的作用機(jī)制，為臨床應(yīng)用IL-24基因防治瘢痕疙瘩提供充足的理論基礎(chǔ)和實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
　　 方法：⑴合成引物，以含hIL-24的質(zhì)粒為模板，PCR擴(kuò)增出hIL-24基因，并重組到質(zhì)粒GV208-GFP，酶切、測序鑒定正確后，將重組質(zhì)粒GV208-hIL-24與包膜質(zhì)粒pH

2、elper1.0及包裝質(zhì)粒pHelper2.0共轉(zhuǎn)染到293T細(xì)胞，包裝出復(fù)制缺陷的慢病毒顆粒，進(jìn)行病毒滴度的測定。⑵根據(jù)實(shí)驗(yàn)需要，將瘢痕疙瘩成纖維細(xì)胞(Keloid fibroblast，KF)分為3組:KF組（空白對照組）、KF-LV組（轉(zhuǎn)染空載體慢病毒組）和KF-IL24組（轉(zhuǎn)染重組慢病毒LV-IL-24組）。分別采用逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈反應(yīng)(RT-PCR法)和蛋白印跡(Western-blot)的方法檢測各組ERK1/2、p38及S

3、mad3的mRNA和蛋白的表達(dá)水平。
　　 結(jié)果：①通過采用PCR和測序鑒定，證實(shí)h IL-24基因已克隆到慢病毒連接載體GV208中;②收集的慢病毒顆粒感染293T細(xì)胞，病毒滴度達(dá)2.00E+8 TU/ml;③與KF組和KF-LV組相比,KF-IL24組中ERK1/2、Smad3的mRNA和蛋白的表達(dá)水平降低(P＜0.05)，同時(shí)p38的mRNA和蛋白的表達(dá)水平升高(P＜0.05)。
　　 結(jié)論：⑴成功構(gòu)建的攜帶hIL