miR-145在MO感染肺成纖維細胞TGF-β-Smad促纖維化通路中的作用.pdf

1、綿羊肺炎支原體（Mycoplasma ovipneumoniae，MO）是一種致病性微生物，感染綿羊后可導致綿羊出現(xiàn)喘氣、咳嗽、漸進性消瘦和間質(zhì)性肺炎等癥狀，嚴重的可導致綿羊死亡，給羊養(yǎng)殖業(yè)帶來重大的危害，并會造成嚴重的經(jīng)濟損失。間質(zhì)性肺炎的病理改變特征之一為肺間質(zhì)纖維化，這是一種以細胞外基質(zhì)沉積而造成的漸進性疾病。研究表明，TGF-β/Smad促纖維化通路在肺纖維化的形成過程中起著重要的作用。microRNAs是一類可通過靶向作用于其

2、靶mRNA，并使其靶mRNA的翻譯受到抑制的內(nèi)源性非編碼小RNA，它的長度約為21bp～25bp，在進化上高度保守。miR-145是一種22nt的高度保守的miRNA，目前有關(guān)miR-145在肺間質(zhì)纖維化調(diào)節(jié)方面的研究甚少，尤其是miR-145對MO感染肺成纖維細胞（MRC-5）中TGF-β/Smad信號通路的調(diào)控研究尚未見報道，因此研究mi R-145在MO感染MRC-5細胞TGF-β/Smad促纖維化通路中的作用有著重要的價值和意義

3、。
　　本實驗中首先對綿羊基因組是否存在miR-145進行驗證，然后利用生物信息學軟件對miR-145在TGF-β/Smad信號通路中的靶基因進行預(yù)測，再通過熒光素酶報告系統(tǒng)實驗對預(yù)測到的靶基因進行驗證;成功構(gòu)建MO感染MRC-5細胞模型，通過對miR-145的過表達和抑制，來探究miR-145在MO感染MRC-5細胞TGF-β/Smad促纖維化通路中作用，為探究miR-145在抗MO感染中的作用機制提供相關(guān)的實驗依據(jù)。本實驗的主

4、要研究結(jié)果如下:
　　(1)通過基因擴增和測序技術(shù)確定了綿羊基因組中含有miR-145，其序列與本課題組前期實驗中做的miRNA表達譜中所測的序列一致。
　　(2)利用生物信息學軟件對miR-145在TGF-β/Smad促纖維化通路中的靶基因進行預(yù)測，預(yù)測到miR-145的靶基因是Smad3和Smad4，并通過雙熒光素酶報告基因系統(tǒng)實驗證實miR-145在TGF-β/Smad促纖維化通路中的靶基因是Smad3，而Smad4并

5、不是miR-145的靶基因。
　　(3)成功建立了MO感染MRC-5細胞模型，MO感染MRC-5細胞后，細胞中miR-145和纖維化相關(guān)因子的表達量顯著升高。
　　(4)對MO感染MRC-5細胞中miR-145進行過表達和抑制，通過mRNA和蛋白水平上的表達差異檢測表明miR-145可靶向TGF-β/Smad促纖維化通路中的關(guān)鍵因子Smad3，進而影響通路下游因子的表達，實現(xiàn)對TGF-β/Smad促纖維化通路的負向調(diào)控作用。