卡托普利對(duì)幼鼠心臟成纖維細(xì)胞衰老的影響.pdf_第1頁(yè)
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1、目的:心臟成纖維細(xì)胞(Cardiacfibroblasts,CFs)占心臟間質(zhì)細(xì)胞的90%以上,在心臟的正常生長(zhǎng)和病理重塑中起重要作用。心臟成纖維細(xì)胞的異常增殖促進(jìn)心室重塑的發(fā)展,加速心衰的進(jìn)程。因此,應(yīng)用藥物,抑制CFs的增殖,加速CFs的衰老,將會(huì)減緩心肌纖維化的進(jìn)程。卡托普利臨床應(yīng)用廣泛,目前已有研究證明,卡托普利(captopril,Cap)可以延緩心肌纖維化,改善心室重塑,阻止心力衰竭的進(jìn)展。但其分子機(jī)制尚不明確。本實(shí)驗(yàn)擬在細(xì)

2、胞水平,觀察卡托普利對(duì)幼鼠心臟成纖維細(xì)胞衰老的影響,明確卡托普利是否會(huì)加速CFs的衰老,在細(xì)胞水平明確卡托普利延緩心肌纖維化,改善心室重塑的機(jī)制。 方法:原代培養(yǎng)SD大鼠幼鼠心臟成纖維細(xì)胞。經(jīng)3次傳代后,已純化為心臟成纖維細(xì)胞,實(shí)驗(yàn)選用4-7代細(xì)胞。分別以1mg/l、5mg/l及10mg/l卡托普利作用于CFs72h。然后使用流式熒光原位雜交法(Flow-Fish)檢測(cè)CFs端粒長(zhǎng)度的變化;進(jìn)行衰老相關(guān)的β-半乳糖苷酶(SA-β

3、-gal)染色;以流式細(xì)胞儀檢測(cè)CFs細(xì)胞周期的情況;電鏡下觀察各組CFs線粒體損傷情況。以10g/LD-gal作用于CFs72h,建立CFs衰老模型,以1mg/l卡托普利作用于該模型,F(xiàn)low-Fish法檢測(cè)CFs端粒長(zhǎng)度的變化,以流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞周期的情況。 結(jié)果:1.5mg/l及10mg/l卡托普利均可以導(dǎo)致心臟成纖維細(xì)胞端粒的縮短,且隨著卡托普利濃度的增加,細(xì)胞端粒的縮短更為明顯(P<0.001)。1mg/l卡托普利組

4、與對(duì)照組比較端粒長(zhǎng)度無(wú)明顯變化(P=0.882)。 2.5mg/l,及10mg/l卡托普利組出現(xiàn)細(xì)胞內(nèi)藍(lán)染顆粒的堆積,SA-β-gal染色陽(yáng)性。1mg/l組細(xì)胞與對(duì)照組,其SA-β-gal染色陰性。 3.5mg/l及10mg/l卡托普利組細(xì)胞周期G1期比例較對(duì)照組及1mg/l組明顯升高(P<0.001)。 4.電鏡下觀察5mg/l及10mg/l卡托普利處理后心臟成纖維細(xì)胞線粒體部分嵴消失,形成髓鞘樣結(jié)構(gòu)。線粒體損

5、傷明顯,且10mg/l組較5mg/l組線粒體損傷重。1mg/l卡托普利對(duì)心臟成纖維細(xì)胞線粒體無(wú)明顯影響。 5.建立幼鼠CFs衰老模型:以10g/lD-gal作用心臟成纖維細(xì)胞72小時(shí)后,流式熒光原位雜交法(Flow-Fish)檢測(cè)端粒長(zhǎng)度,較對(duì)照組端粒長(zhǎng)度明顯縮短(P<0.001);衰老相關(guān)的β-半乳糖苷酶染色陽(yáng)性明顯;電鏡下觀察心臟成纖維細(xì)胞線粒體部分嵴消失,形成髓鞘樣結(jié)構(gòu)。細(xì)胞總SOD活性較對(duì)照組降低、MDA含量增加(P<0

6、.001)。 6.1mg/l卡托普利+10g/LD-gal培養(yǎng)心臟成纖維細(xì)胞72小時(shí),F(xiàn)low-Fish法檢測(cè)端粒長(zhǎng)度,與10g/lD-gal組比較明顯縮短(P<0.001);細(xì)胞周期G1期比例較10g/LD-gal組比例有所下降(P<0.001)。 結(jié)論:1.5mg/l及10mg/l卡托普利可以顯著的縮短CFs端粒的長(zhǎng)度,影響心臟成纖維細(xì)胞周期,導(dǎo)致CFsSA-β-gal染色陽(yáng)性,及細(xì)胞線粒體損傷。引起CFs衰老的發(fā)生

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