ADMA對(duì)人皮膚成纖維細(xì)胞衰老的作用及機(jī)制研究.pdf

1、目的:
　　 研究非對(duì)稱性二甲基精氨酸(asymmetrical dimethylarginine，ADMA)對(duì)人皮膚成纖維細(xì)胞（Human skin fibroblasts，HSF）衰老的影響及其可能機(jī)制。
　　 方法:
　　 1.用高效液相色譜(HPLC)法測(cè)定自然衰老和光老化皮膚組織和成纖維細(xì)胞中ADMA的濃度。
　　 2.原代培養(yǎng)人皮膚成纖維細(xì)胞，MTT比色法評(píng)價(jià)ADMA對(duì)HSF增殖的影響，確定最

2、佳藥物處理濃度。
　　 3.不同濃度ADMA(10，30，50μM)作用于HSF，48小時(shí)后，用β-半乳糖苷酶染色試劑盒檢測(cè)衰老相關(guān)β-半乳糖苷酶活性，活性氧檢測(cè)試劑盒檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)活性氧(Reactive Oxygen Species，ROS)濃度，免疫印跡法(western-bolt)檢測(cè)磷酸化p38 MAPK，衰老相關(guān)蛋白P16、MMP-1的改變。
　　 4.預(yù)先加入P38抑制劑SB203580(10μM)或抗氧化劑N

3、-乙酰半胱氨酸(NAC)(10μM)1小時(shí)后，再加入ADMA(50μM)處理，上述同樣的方法檢測(cè)以上指標(biāo)。
　　 結(jié)果:
　　 1.年老組皮膚組織和成纖維細(xì)胞中ADMA含量均明顯高于兒童組(P＜0.05)，同一人中曝光部位皮膚組織中ADMA含量明顯高于非曝光部位(P＜0.05)，UVA照射后HSF中ADMA的含量明顯升高(P＜0.05)。
　　 2.ADMA能抑制人皮膚成纖維細(xì)胞的增殖，且隨濃度增加，抑制能力也相

4、應(yīng)增強(qiáng)，IC50=51.47±1.013μM。
　　 3.不同濃度ADMA(10，30，50μM)處理HSF48小時(shí)后，細(xì)胞密度減少、細(xì)胞變大變圓，β-半乳糖苷酶染色率、衰老相關(guān)蛋白P16均隨ADMA濃度的增加而增加(P＜0.05)，細(xì)胞出現(xiàn)衰老表型。
　　 4.不同濃度ADMA(10，30，50μM)處理HSF后，ROS水平隨濃度增加而增加，磷酸化p38MAPK、MMP-1蛋白亦隨濃度逐漸增加(P＜0.05)。

5、　　 5.P38抑制劑SB203580（10μM）能顯著下降A(chǔ)DMA所致的β-半乳糖苷酶染色率、P16蛋白及MMP-1蛋白的升高;抗氧化劑NAC(10μM)亦能明顯下降A(chǔ)DMA所致的β-半乳糖苷酶染色率、P16蛋白、ROS濃度、磷酸化p38 MAPK及MMP-1蛋白的升高。
　　 結(jié)論:
　　 1.自然衰老和光老化皮膚組織及成纖維細(xì)胞中ADMA的含量顯著上升，ADMA在皮膚衰老過(guò)程中起重要作用;
　　 2.AD