UVA輻射對人皮膚成纖維細胞的過氧化損傷及EGCG的保護作用.pdf

1、人的皮膚，和所有其他器官一樣，隨著年齡的增長不斷發(fā)生老化。由于皮膚是機體與外界環(huán)境直接接觸的器官，因此也經歷著紫外線照射引起的皮膚的光老化現(xiàn)象。光老化皮膚很多的功能隨著年齡的增長逐漸降低，并且由于皮膚發(fā)生氧化損傷，皮膚細胞中抗氧化酶的活性和非酶抗氧化劑的含量也隨著年齡的增長不斷下降。
　　UVA可以通過誘導生成活性氧ROS（主要包括超氧陰離子、過氧化氫、和單線態(tài)氧）間接損傷DNA。ROS不但損害細胞DNA，還可參與脂質和蛋白質的氧

2、化損傷，如膠原蛋白的降解。由UVA輻射引起的誘變還可能涉及反式尿酸的產生和基因表達的變化。
　　皮膚生物學的最新研究進展已經闡明了光老化的發(fā)生機制，并提出了許多新的治療方法以預防和改變該進程。綠茶中的表沒食子兒茶素沒食子酸酯(EGCG)是有效的抗氧化劑，目前已經見于眾多的護膚品中。
　　本研究用EGCG孵育人皮膚成纖維細胞，然后進行UVA照射，目的是通過測試氧化損傷的指標，探討EGCG在皮膚光老化過程中的功能。同時還研究了E

3、GCG對VEGF、Ⅰ型膠原、Ⅲ型膠原基因表達的影響，以觀察EGCG對暴露在紫外線下的人體皮膚成纖維細胞的作用。
　　以長波紫外線(UVA)輻射人皮膚成纖維細胞(HSF)建立光老化模型，在此基礎上給予EGCG干預，探討EGCG對UVA輻射條件下人皮膚成纖維細胞(HSF)的保護作用及其可能的保護機制。將人皮膚成纖維細胞株接種于100 mm培養(yǎng)皿或96孔培養(yǎng)板中，用含10％胎牛血清的DMEM高糖培養(yǎng)基，于37℃、5％ CO2培養(yǎng)箱中進行

4、培養(yǎng)。將培養(yǎng)皿中的細胞隨機分為3組：對照組，UVA組和UVA+EGCG組；并分別于UVA照射前、后加入相關藥物進行干預處理。采用MTT法檢測細胞活力；酶生化法測定胞漿中谷胱甘肽過氧化物酶活性(GSH-px)、抗超氧陰離子自由基活力(A-SAC)、丙二醛(MDA)含量：熒光定量PCR法檢測細胞血管內皮生長因子(VEGF)、Ⅰ型、Ⅲ型膠原蛋白基因的表達。試驗結果分析采用單因素方差分析法，應用SPSS17.0進行數(shù)據(jù)處理，確定P<0.05作為

5、差異顯著性的標準。主要研究結果如下：
　　1．EGCG對受UVA照射的成纖維細胞具有保護作用
　　UVA照射成纖維細胞后，細胞增殖受到明顯抑制，并呈現(xiàn)劑量依賴關系。但UVA照射前，以一定濃度的EGCG(40μg/mL以下)孵育2個小時，細胞的增殖活性明顯增加。
　　2．EGCG對受UVA照射的人皮膚成纖維細胞抗氧化活力的影響
　　UVA照射后，經過EGCG孵育的人皮膚成纖維細胞GSH-Px活力和抗超氧陰離子活力明

6、顯高于未經EGCG處理的細胞，但脂質過氧化產物丙二醛(MDA)水平則降低。這說明，EGCG可以通過增加抗氧化酶的活性和減少脂質的過氧化作用對人皮膚成纖維細胞起保護作用。
　　3．EGCG對受UVA照射人皮膚成纖維細胞膠原蛋白基因表達量的影響
　　UVA輻射抑制體外培養(yǎng)真皮成纖維細胞的膠原合成。真皮成纖維細胞受UVA照射后，Ⅰ型和Ⅲ型膠原基因的表達量顯著降低。若在接受UVA照射前細胞以一定濃度的EGCG孵育2小時，可顯著提高膠

7、原基因的表達水平。說明EGCG可部分減輕UVA對Ⅰ型和Ⅲ型膠原基因表達的抑制作用，對皮膚的光老化有一定的保護作用。
　　4．EGCG對UVA照射人皮膚成纖維細胞VEGF基因表達量的影響
　　UVA照射成纖維細胞24h后，VEGF的表達顯著增高。顯示UVA輻射可刺激血管內皮生長因子分泌，EGCG處理可以抑制UVA照射引起VEGF的過度表達。
　　本研究的的主要結論是：UVA可以劑量依賴的方式抑制人皮膚成纖維細胞增殖，EG