GX-50對中波紫外線輻射皮膚成纖維細(xì)胞的保護作用.pdf

1、研究背景:皮膚老化分為自然老化和光老化,后者是由于皮膚長期暴露于紫外線下而造成的慢性損傷。紫外線中的中波紫外線(UVB)可直接作用于 DNA使其形成嘧啶二聚體,對皮膚的損傷比長波紫外線(UVA)約大1000倍,更容易導(dǎo)致皮膚癌的發(fā)生。長期UVB輻射會影響多種細(xì)胞成分和組織結(jié)構(gòu),但最具有特征性的是真皮成分的變化,成纖維細(xì)胞是真皮層的主要細(xì)胞,對維持真皮層形態(tài)和功能具有重要作用。皮膚光老化涉及一系列復(fù)雜的分子反應(yīng),包括活性氧簇(ROS)過量

2、生成、上調(diào)基質(zhì)金屬蛋白酶(MMP)加速胞外基質(zhì)蛋白(ECM)降解、活化一系列信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路等。因此尋找有效的紫外線防護品,阻止紫外線誘發(fā)的皮膚光老化是國內(nèi)外研究的熱點。本實驗室前期研究表明,源自花椒的天然活性物質(zhì)GX-50對于核轉(zhuǎn)錄因子-κ B(NF-κ B)途徑有抑制作用,在組織和細(xì)胞水平可以有效保護皮膚,延緩皮膚衰老的發(fā)生。
　　研究目的:本項實驗旨在研究 UVB對皮膚成纖維細(xì)胞的損害,以及GX-50對UVB輻射損傷后皮膚成纖維

3、細(xì)胞的保護作用及可能機制。
　　研究方法:組織塊法分離培養(yǎng)原代SD大鼠皮膚成纖維細(xì)胞,通過觀察不同劑量UVB照射后的細(xì)胞形態(tài)學(xué)改變確定后續(xù)實驗的UVB單次照射劑量;MTT法檢測不同濃度 GX-50處理后的細(xì)胞活性,確定后續(xù)實驗的加藥濃度。采用衰老相關(guān)β-半乳糖苷酶(SA-β-Gal)細(xì)胞化學(xué)染色法確定皮膚細(xì)胞衰老程度;測定丙二醛(MDA)和ROS含量評估皮膚細(xì)胞氧化損傷的程度;酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA)法檢測細(xì)胞TGF-β1表

4、達(dá)量的變化;Western blot法檢測細(xì)胞彈性蛋白表達(dá)量的變化。
　　實驗結(jié)果:UVB輻射成纖維細(xì)胞后,細(xì)胞出現(xiàn)胞體增大、顆粒增多、部分凋亡等現(xiàn)象,選取不會引起細(xì)胞凋亡的最大劑量50mJ/cm2作為后續(xù)實驗單次照射劑量;MTT結(jié)果顯示10-6、10-5M的GX-50在孵育24h時顯著增加成纖維細(xì)胞存活率,根據(jù)實驗室前期經(jīng)驗選取了10-6M的 GX-50作為后續(xù)實驗濃度。SA-β-Gal染色實驗結(jié)果顯示:經(jīng) UVB照射后成纖維細(xì)

5、胞染色陽性率較對照組顯著上升,說明已有部分細(xì)胞被誘導(dǎo)進入光損傷狀態(tài),而GX-50預(yù)處理后UVB輻射組的陽性率明顯降低;MDA、ROS檢測結(jié)果顯示:UVB處理組與空白對照組相比,MDA含量有明顯上升,GX-50預(yù)處理后的UVB處理組的MDA含量基本與對照組持平;ELISA結(jié)果顯示:UVB輻射后TGF-β1分泌減少,與對照組之間差異有顯著性,GX-50預(yù)處理后輻射組則明顯上升,與單純輻射組之間差異有顯著性;Western blot實驗結(jié)果顯