中波紫外線輻射損傷人角質(zhì)形成細(xì)胞的分子機(jī)制研究.pdf

1、 本研究以不同劑量的UVB輻射正常人表皮KC和永生化人KC株——HaCaT細(xì)胞，檢測(cè)輻射后不同時(shí)間的細(xì)胞活性和細(xì)胞周期的變化，以及代表不同時(shí)相的凋亡通路：即應(yīng)用廣譜caspase抑制劑VAD-FMK與凋亡細(xì)胞中活化的caspase不可逆的結(jié)合檢測(cè)早期Caspase介導(dǎo)的凋亡；應(yīng)用AnnexinV及PI雙染方法檢測(cè)后發(fā)的細(xì)胞膜介導(dǎo)的凋亡；以及應(yīng)用DNA的梯度凝膠電泳檢測(cè)晚期細(xì)胞核介導(dǎo)的凋亡。應(yīng)用RT-PCR、實(shí)時(shí)定量RT-PCR和免

2、疫印跡方法，分別從mRNA水平和蛋白質(zhì)水平，研究UVB輻射NHEK和HaCaT的不同劑量和不同時(shí)相時(shí)，p53及其下游分子MDM2、p21、Bax和GADD45的表達(dá)，探討p53信號(hào)傳導(dǎo)通路在UVB輻射損傷KC的作用。通過(guò)免疫印跡、電泳遷移率分析方法(EMSA)，檢測(cè)不同劑量UVB輻射NHEK和HaCaT后，NF-κB的時(shí)相性變化和轉(zhuǎn)錄情況，并通過(guò)NF-κB活化的抑制劑BAY11-7085對(duì)NF-κB活化通路的抑制，探究核轉(zhuǎn)錄因子NF-κ