鐵皮石斛對人正常皮膚成纖維細胞GM06396輻射防護作用的研究.pdf

1、目的：檢測不同濃度鐵皮石斛對人正常皮膚成纖維細胞GM0639存活率的影響，并通過細胞實驗評價鐵皮石斛的輻射防護作用的效果。
　　 方法：采用傳統(tǒng)的中藥煎煮方法制取鐵皮石斛煎劑；采用MTT法檢測不同藥物濃度及不同藥物作用時間對細胞存活率的影響，MTT法測定相同劑量60Coγ射線照射后培養(yǎng)24h未加藥組和加不同濃度藥物組GM0639細胞的存活率；通過胞質分裂阻滯法(CB法)計數鐵皮石斛煎劑作用聯(lián)合不同劑量60Coγ射線照射后的微核率

2、(Micronucleus frequency，MNF)和微核細胞率(Micronucleus cell frequency，MNCF)，將鐵皮石斛煎劑作用的細胞與單純照射細胞的微核率比較和微核細胞率的統(tǒng)計分析結果進行比較；流式細胞儀PI單染法檢測GM0639細胞經鐵皮石斛及4Gy60Coγ射線作用后細胞周期的變化；AnnexinV-FITC/PI凋亡試劑盒檢測不同濃度鐵皮石斛對4Gy60Coγ射線作用后細胞凋亡的影響。
　　

3、結果：鐵皮石斛煎劑在給藥濃度0～100mg/mL(鮮藥的質量比上終溶液量)范圍內，鐵皮石斛對GM0639沒有細胞毒性。4Gy照射后培養(yǎng)24h，隨著藥物濃度的增加，細胞的存活率均顯著增加，加藥60mg/ml就可明顯提高細胞的存活率。4Gy照射后培養(yǎng)24h，在試驗藥物濃度為60mg/mL，作用時間為24h時，將CB微核法得到的數據進行回歸擬合可以得到藥物作用及未經藥物作用的劑量效應曲線，比較兩組曲線，鐵皮石斛作用組的微核率及微核細胞率明顯低

4、于單純照射組(p<0.05)。流式細胞儀PI單染法結果表明，4Gy60Coγ射線作用后GM0639細胞SubG1峰明顯增高，隨著加入的鐵皮石斛濃度的增高，SubG1峰逐漸降低，藥物濃度為100mg/mL組與單照組相比SubG1峰由33.14±2.11％降至5.57±1.02％(p<0.05)，表明鐵皮石斛具有輻射防護作用；流式細胞儀AnnexinV-FITC/PI雙染法檢測細胞凋亡的結果表明，輻射損傷后細胞早期與晚期的凋亡率均增加，而不