鐵皮石斛對(duì)人正常皮膚成纖維細(xì)胞GM06396輻射防護(hù)作用的研究.pdf

1、目的：檢測(cè)不同濃度鐵皮石斛對(duì)人正常皮膚成纖維細(xì)胞GM0639存活率的影響，并通過細(xì)胞實(shí)驗(yàn)評(píng)價(jià)鐵皮石斛的輻射防護(hù)作用的效果。
　　 方法：采用傳統(tǒng)的中藥煎煮方法制取鐵皮石斛煎劑；采用MTT法檢測(cè)不同藥物濃度及不同藥物作用時(shí)間對(duì)細(xì)胞存活率的影響，MTT法測(cè)定相同劑量60Coγ射線照射后培養(yǎng)24h未加藥組和加不同濃度藥物組GM0639細(xì)胞的存活率；通過胞質(zhì)分裂阻滯法(CB法)計(jì)數(shù)鐵皮石斛煎劑作用聯(lián)合不同劑量60Coγ射線照射后的微核率

2、(Micronucleus frequency，MNF)和微核細(xì)胞率(Micronucleus cell frequency，MNCF)，將鐵皮石斛煎劑作用的細(xì)胞與單純照射細(xì)胞的微核率比較和微核細(xì)胞率的統(tǒng)計(jì)分析結(jié)果進(jìn)行比較；流式細(xì)胞儀PI單染法檢測(cè)GM0639細(xì)胞經(jīng)鐵皮石斛及4Gy60Coγ射線作用后細(xì)胞周期的變化；AnnexinV-FITC/PI凋亡試劑盒檢測(cè)不同濃度鐵皮石斛對(duì)4Gy60Coγ射線作用后細(xì)胞凋亡的影響。
　　

3、結(jié)果：鐵皮石斛煎劑在給藥濃度0～100mg/mL(鮮藥的質(zhì)量比上終溶液量)范圍內(nèi)，鐵皮石斛對(duì)GM0639沒有細(xì)胞毒性。4Gy照射后培養(yǎng)24h，隨著藥物濃度的增加，細(xì)胞的存活率均顯著增加，加藥60mg/ml就可明顯提高細(xì)胞的存活率。4Gy照射后培養(yǎng)24h，在試驗(yàn)藥物濃度為60mg/mL，作用時(shí)間為24h時(shí)，將CB微核法得到的數(shù)據(jù)進(jìn)行回歸擬合可以得到藥物作用及未經(jīng)藥物作用的劑量效應(yīng)曲線，比較兩組曲線，鐵皮石斛作用組的微核率及微核細(xì)胞率明顯低

4、于單純照射組(p<0.05)。流式細(xì)胞儀PI單染法結(jié)果表明，4Gy60Coγ射線作用后GM0639細(xì)胞SubG1峰明顯增高，隨著加入的鐵皮石斛濃度的增高，SubG1峰逐漸降低，藥物濃度為100mg/mL組與單照組相比SubG1峰由33.14±2.11％降至5.57±1.02％(p<0.05)，表明鐵皮石斛具有輻射防護(hù)作用；流式細(xì)胞儀AnnexinV-FITC/PI雙染法檢測(cè)細(xì)胞凋亡的結(jié)果表明，輻射損傷后細(xì)胞早期與晚期的凋亡率均增加，而不