成年皮膚成纖維細(xì)胞克隆綿羊的生產(chǎn).pdf

1、本實(shí)驗(yàn)通過(guò)不同激活方法對(duì)綿羊體外成熟卵母細(xì)胞孤雌激活胚胎早期發(fā)育效果進(jìn)行了比較分析，為綿羊體細(xì)胞核移植后重構(gòu)胚的激活奠定了一定的基礎(chǔ)；比較了不同融合電壓對(duì)重構(gòu)胚發(fā)育的影響；比較了不同胚齡重構(gòu)胚的胚胎移植對(duì)產(chǎn)羔率的影響。 在37℃、5％CO2、飽和濕度下，采用10％FBS的DMEM/F12培養(yǎng)液和組織塊直接培養(yǎng)法培養(yǎng)綿羊皮膚成纖維細(xì)胞，有效的建立了綿羊皮膚成纖維細(xì)胞系。通過(guò)生長(zhǎng)曲線測(cè)定和染色體計(jì)數(shù)可確定分離培養(yǎng)的綿羊皮膚成纖維細(xì)胞

2、基本符合體外培養(yǎng)細(xì)胞生長(zhǎng)特性。 電激活和化學(xué)激活方法都可有效激活綿羊卵母細(xì)胞，但離子霉素聯(lián)合6—DMAP激活綿羊卵母細(xì)胞的卵裂率和桑椹＼囊胚率為78.90％和41.95％，優(yōu)于7％乙醇聯(lián)合6—DMAP的卵裂率75.47％和桑椹＼囊胚率37.11％；顯著高于電激活的卵裂率57.68％和桑椹＼囊胚率18.31％。 對(duì)處于不同胚齡的克隆胚采用手術(shù)法進(jìn)行胚胎移植，融合胚、2-16cell胚、桑囊胚的妊娠率分別為14.4％、0、3