皮膚成纖維細胞中dystrophin基因的表達研究.pdf

1、目的： 研究皮膚成纖維細胞中dystrophin mRNA和dystrophin的表達，探索應用皮膚成纖維細胞作為轉化有遺傳缺陷肌細胞研究時供體的可行性。 方法： 1、組織塊法體外培養(yǎng)0～1日齡正常小白鼠皮膚成纖維細胞，待細胞爬滿培養(yǎng)皿后除去組織塊，用0.25％胰酶消化處理，按1：3傳代。然后通過RT-PCR和Western blot技術分別檢測經培養(yǎng)的小白鼠原代及第1～4代皮膚成纖維細胞中dystrophin

2、mRNA及dystrophin的表達。 2、將小白鼠骨骼肌、心臟、肝臟、腎臟和皮膚組織剪碎后放入液氮中研磨，然后加裂解液勻漿，最后通過RT-PCR和Western blot技術分別檢測小白鼠各組織中dystrophin mRNA及dystrophin的表達。 3、將小白鼠骨骼肌和皮膚組織剪碎放入液氮凍后再碾磨成細顆粒狀，加入裂解緩沖液勻漿至不見組織塊，最后通過PCR檢測確認小白鼠皮膚成纖維細胞基因組DNA中含有dystr

3、ophin基因。 結果： 1、RT-PCR結果： （1）細胞水平上檢測：小白鼠骨骼?。栃詫φ眨┙洈U增，產物呈573bp的特異性DNA條帶，而經培養(yǎng)的小白鼠原代及第1～4代皮膚成纖維細胞均沒有擴增到任何條帶。 （2）組織水平上檢測：小白鼠骨骼肌和心肌經擴增，產物呈573bp的特異性DNA條帶，而小白鼠皮膚、肝臟和腎臟組織均未擴增到任何條帶。 實驗結果表明dystrophin mRNA在皮膚成纖維細

4、胞中無表達。 2、Western blot結果： （1）細胞水平上檢測：小白鼠骨骼肌（陽性對照）出現了約427KD的特異性條帶，而小白鼠原代及第1～4代皮膚成纖維細胞均沒有出現反應條帶。 （2）組織水平上檢測：小白鼠骨骼肌和心肌均出現了約427KD的特異性條帶，而小白鼠皮膚、肝臟和腎臟組織均未出現反應條帶。 實驗結果表明dystrophin在皮膚成纖維細胞中無表達。 3、PCR結果： 小白