丙酮醛對人牙周膜成纖維細胞基因表達影響的實驗研究.pdf

1、[目的]：從基因差異性表達方面，研究丙酮醛誘導(dǎo)人牙周膜成纖維細胞凋亡的機理，為進一步了解口腔致病菌誘導(dǎo)牙周炎癥的機制提供科學(xué)的依據(jù)。 [方法]：組織塊培養(yǎng)法獲取人牙周膜成纖維細胞，按1:2或1:3的比例進行傳代，取4—7代的細胞進行實驗。以0.05、O.1、0.25、0.5、1.0mg/ml丙酮醛分別作用于細胞密度為5×10S/mL及5×10<,4>/mI，人牙周膜成纖維細胞中。24h后采用苔盼蘭染色方法測定丙酮醛刺激人牙周膜

2、成纖維細胞后的細胞活性，并以之確定實驗藥物濃度。以含該濃度丙酮醛液的培養(yǎng)液及不含丙酮醛液的培養(yǎng)液分別培養(yǎng)細胞24h。提取丙酮醛處理前后細胞的RNA，逆轉(zhuǎn)錄獲取cDNA，分別用Cy5和Cy3標(biāo)記。利用基因芯片分析丙酮醛刺激人牙周膜成纖維細胞差異表達基因。 [結(jié)果]：密度為5×10<'5>/mL人牙周膜成纖維細胞與丙酮醛孵育24h后，在0.5、1.0mg/ml時，可見大部分細胞皺縮及苔盼蘭染色；密度為5×10<'4>/mL人牙周膜

3、成纖維細胞與丙酮醛孵育24h后，在0.25、0.5、1.0mg/ml三個濃度，可見大部分細胞皺縮及苔盼蘭染色。基因芯片分析發(fā)現(xiàn)丙酮醛刺激人牙周膜成纖維細胞后有5條上調(diào)基因和3條下調(diào)基因，其中部分基因與凋亡、出血及癌癥相關(guān)。 [結(jié)論]：牙周致病菌代謝產(chǎn)物丙酮醛刺激人牙周膜成纖維細胞后，細胞出現(xiàn)凋亡以至死亡，凋亡率、死亡率隨藥物濃度增大、作用時間增長而增加；且導(dǎo)致細胞死亡的藥物濃度與細胞密度有關(guān)；基因芯片分析發(fā)現(xiàn)差異表達基因，進而影