流體剪切力對牙周膜成纖維細胞分泌COX-2的影響.pdf

1、目的:
　　探索對體外培養(yǎng)的人牙周膜成纖維細胞(human periodontal ligament fibroblast，HPDLF)施加不同轉(zhuǎn)速及時間的流體剪切力（fluid shear stress，F(xiàn)SS)，對其合成環(huán)氧合酶2（cyclooxygenase2，COX-2)的影響，初步探討兩因素與HPDLF分泌COX-2關(guān)系。
　　材料與方法:
　　用高血清結(jié)合改良組織塊酶消化法培養(yǎng)獲得HPDLF，對細胞進行純化

2、及鑒定后，選用5-8代HPDLF進行體外加力實驗。建立體外FSS加載裝置系統(tǒng)，分別對細胞加載0rpm、5rpm、8rpm、12rpm、15rpm轉(zhuǎn)速的FSS1、2、6h，使用免疫細胞化學(xué)染色檢測細胞合成COX-2蛋白量的變化。
　　結(jié)果:
　　實驗結(jié)果分析表明加力轉(zhuǎn)速、加力時間以及轉(zhuǎn)速與時間的交互作用對細胞合成COX-2均有影響（P值均<0.001），當(dāng)不加載力時（0rpm），灰度值=250,測定蛋白為陰性表達。當(dāng)不考慮加力

3、轉(zhuǎn)速因素時，不同時間點灰度值存在差異（P<0.001），加載1h時灰度值開始呈現(xiàn)減小趨勢，加載2h時灰度值最低，而6h的灰度值最高（P<0.001）。當(dāng)不考慮時間因素時，不同轉(zhuǎn)速灰度值存在差異（P<0.001），加載5rpm時灰度值開始降低，當(dāng)轉(zhuǎn)速增加至12rmp時灰度值最低，再上升到15rpm時灰度值再次升高。從兩因素分別來看，提示當(dāng)加力轉(zhuǎn)速及時間在一定范圍內(nèi)時，測定蛋白陽性表達量與之呈正相關(guān)，細胞形態(tài)趨于正常；當(dāng)超出一定范圍時，蛋白

4、陽性表達量與之呈負(fù)相關(guān)，細胞呈現(xiàn)非生理正常形態(tài)。當(dāng)同時考慮雙因素變化時（P值均<0.001），轉(zhuǎn)速為12rmp、時間為2h的灰度值最低。提示對HPDLF加載的FSS，其加載轉(zhuǎn)速及時間在一定范圍內(nèi)時，測定蛋白的表達量與之呈正相關(guān)，當(dāng)超出細胞生理承受范圍時，蛋白表達量與之呈負(fù)相關(guān)。在本實驗中，當(dāng)加載12rpm的FSS，2h時，COX-2蛋白的表達量達到峰值。
　　結(jié)論:
　　體外加載FSS可影響HPDLF分泌COX-2蛋白量的表