塞來昔布對IL-1β誘導(dǎo)下人牙周膜成纖維細胞中COX-2、IL-8表達的影響.pdf

1、目的:(1)觀察不同濃度IL-1β誘導(dǎo)下人牙周膜成纖維細胞中COX-2的表達情況。(2)觀察塞來昔布對IL-1β誘導(dǎo)的人牙周膜成纖維細胞表達COX-2和IL-8的影響，為探討塞來昔布控制牙周組織炎癥的臨床應(yīng)用提供實驗依據(jù)。
　　 方法:(1)體外原代培養(yǎng)人牙周膜成纖維細胞，并對其來源進行鑒定。(2)選取5～8代人牙周膜成纖維細胞，隨機分為正常對照組和實驗組，正常對照組加入無血清培養(yǎng)液，實驗組分別加入含0.1ng/ml、0.5ng

2、/ml、1ng/ml、5ng/ml、10ng/mlIL-1β的無血清培養(yǎng)液，采用免疫組織化學(xué)方法和ELISA法檢測HPLFs中COX-2的表達狀況，并探尋實驗濃度范圍內(nèi)，引起最強炎癥的IL-1β濃度。(3)選取5～8代人牙周膜成纖維細胞，隨機分為對照組和實驗組，實驗組為在含10ng/mlIL-1β的無血清培養(yǎng)基中分別加入0μM、10μM、25μM、50μM、100μM以二甲基亞砜(dimethyl sulfoxide，DMSO)助溶的塞

3、來昔布;對照組為含有同樣濃度DMSO的無血清培養(yǎng)基。采用ELISA法檢測塞來昔布對IL-1β誘導(dǎo)下人牙周膜成纖維細胞中COX-2和IL-8表達情況的影響。
　　 結(jié)果:(1)體外成功的培養(yǎng)人牙周膜成纖維細胞，倒置顯微鏡下:細胞為長梭形或者星形，呈典型的成纖維樣細胞形態(tài);免疫組織化學(xué)染色:人牙周膜成纖維細胞抗角蛋白染色陰性，抗波形絲蛋白染色陽性，表現(xiàn)出來源于中胚層的成纖維樣細胞特性。(2)不同濃度的IL-1β干預(yù)人牙周膜成纖維細胞

4、后COX-2表達的免疫組化結(jié)果顯示:正常對照組中COX-2呈陰性表達，經(jīng)lL-1β誘導(dǎo)后的人牙周膜成纖維細胞中COX-2在胞漿和核膜呈陽性表達;且COX-2表達強度隨IL-1β誘導(dǎo)濃度的升高呈現(xiàn)增強的趨勢(P＜0.05)。ELISA檢測結(jié)果同樣證實了COX-2的表達隨IL-1β誘導(dǎo)濃度的升高而增強(P＜0.05)。(3)塞來昔布對經(jīng)IL-1β誘導(dǎo)下HPLFs中COX-2表達影響的實驗顯示:不同濃度的塞來昔布均可減少致炎后HPLFs中CO

5、X-2的表達，與未加藥組比較，P＜0.05;且隨著塞來昔布濃度的增加，HPLFs中COX-2表達呈現(xiàn)逐漸遞減的趨勢，實驗各組間比較，P＜0.05。對IL-8表達影響的實驗顯示:加有不同濃度塞來昔布的各實驗組中，IL-8表達均有不同程度的減少，除10μM組外，其他加藥組與未加藥組比較，P＜0.05;當塞來昔布的濃度在25μM內(nèi)時，IL-8的表達隨著塞來昔布濃度的升高而減少，在25μM時其表達最弱，與對照組比較，P＞0.05;當塞來昔布的濃

6、度大于25μM時，IL-8的表達隨著塞來昔布濃度的增加有小幅度的增高，但組間比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義，P＞0.05。
　　 結(jié)論:(l)組織塊培養(yǎng)法培養(yǎng)牙周膜成纖維細胞步驟簡單易掌握，可為探討牙周組織相關(guān)疾病提供實驗條件。(2)11-1β誘導(dǎo)人牙周膜成纖維細胞后有COX-2表達，且COX-2的表達強度與IL-1β濃度呈正相關(guān)關(guān)系，說明COX-2與牙周病的發(fā)生發(fā)展存在一定關(guān)系。(3)塞來昔布可有效減少經(jīng)IL-1β干預(yù)后的人牙周膜成纖