細胞內(nèi)IL-1α調(diào)控沙眼衣原體誘導IL-8產(chǎn)生機制研究.pdf

1、沙眼衣原體(Chlamydia trachomatis，Ct)是重要的性傳播疾病病原體，Ct感染可引起宮頸炎、輸卵管炎和盆腔炎，并導致流產(chǎn)、異位妊娠、不孕等嚴重后遺癥。Ct感染可刺激上皮細胞產(chǎn)生大量炎性細胞因子，參與調(diào)節(jié)宿主的防御作用。促炎細胞因子IL-1α是機體抵抗感染的重要炎性介質(zhì)，其可誘導自身(IL-1α)、IL-6和IL-8等炎癥因子的產(chǎn)生。
　　目的:探討細胞內(nèi)IL-1α在沙眼衣原體早期誘導IL-8產(chǎn)生中的重要作用;Ha

2、x-1蛋白與IL-1α相互作用調(diào)控沙眼衣原體感染誘導IL-8產(chǎn)生，探討Ct感染時細胞內(nèi)IL-1α參與IL-8產(chǎn)生調(diào)控的分子機制。
　　方法:
　　1.ELISA、細胞免疫熒光檢測沙眼衣原體感染誘導的炎癥因子的產(chǎn)生和定位，復蘇已建立的單克隆穩(wěn)定細胞系，ELISA方法篩選出內(nèi)源性IL-1α沉默效果最佳的HeLa229穩(wěn)定細胞系。
　　2.構建pro-IL-1α全長質(zhì)粒并轉染穩(wěn)定細胞系，ELISA檢測外源性IL-1α對沙眼衣

3、原體誘導促炎性細胞因子IL-8產(chǎn)生的影響。
　　3.Western blot和細胞免疫熒光檢測Ct感染后Hax-1在HeLa229細胞中的表達及亞細胞定位細胞，免疫熒光檢測Ct感染后Hax-1和IL-1α的共定位;
　　4.利用siRNA技術下調(diào)HeLa229細胞Hax-1的表達，ELISA檢測Hax-1沉默對Ct感染后IL-8產(chǎn)生的影響。
　　結果:
　　1.Ct感染HeLa229細胞后44h可產(chǎn)生炎癥細胞因子

4、IL-1α和IL-8，其中IL-1α主要表達于細胞內(nèi)，IL-8則主要分泌于細胞外。
　　2.細胞免疫熒光檢測到Ct感染后IL-1α入核，同時伴有IL-8的產(chǎn)生。
　　3.篩選出內(nèi)源性IL-1α沉默效果最佳的HeLa229穩(wěn)定細胞株S2C2，沉默效率約79％，Ct感染后44h，與空質(zhì)粒載體轉染細胞相比，S2C2穩(wěn)定細胞培養(yǎng)上清IL-8的表達顯著降低。
　　4.將pro-IL-1α基因全長質(zhì)粒轉染S2C2穩(wěn)定細胞株，ELI

5、SA檢測結果證實S2C2細胞可以表達外源性pro-IL-1α，Ct感染S2C2細胞后外源性IL-1α誘導促炎因子IL-8的表達。
　　5.Western blot實驗證明Ct感染HeLa229細胞48h，Hax-1表達顯著增高。
　　6.免疫熒光實驗證明Ct刺激44h時IL-1α、Hax-1有共入核現(xiàn)象，利用siRNA技術沉默Hax-1基因的表達對Ct感染誘導的IL-8產(chǎn)生無影響。
　　結論:
　　1.Ct感染早