沙眼衣原體呼吸道感染誘導中性粒細胞浸潤機制的研究.pdf

1、目的:
　　用沙眼衣原體小鼠肺炎菌株(Chlamydia muridarum，Cm)呼吸道吸入感染小鼠誘導小鼠衣原體肺炎。在感染后的不同時期，檢測中性粒細胞(polymorphonuclearneutrophils, PMN)的免疫應答水平、PMN聚集與細胞因子IL-17分泌的相關(guān)性，以及與PMN聚集相關(guān)的細胞因子、趨化因子、粘附分子及Toll樣受體的表達水平，探討在小鼠Cm呼吸道感染中PMN浸潤機制。
　　方法:
　

2、　C57BL/6(C57)小鼠經(jīng)鼻腔吸入3×103IFU Cm，建立小鼠沙眼衣原體肺炎模型。取感染不同時間點小鼠肺組織進行組織病理學染色、分離肺組織單個核細胞進行PMN計數(shù)以及肺組織髓過氧化物酶(myelo-peroxidase，MPO)檢測，確定感染小鼠肺組織有中性粒細胞聚集;用流式細胞術(shù)檢測聚集的PMN活性變化。應用RT-PCR技術(shù)檢測Cm感染誘導肺組織IL-17mRNA的表達，利用ELISA技術(shù)檢測肺組織單個細胞培養(yǎng)上清IL-17

3、的分泌，應用抗鼠IL-17單克隆抗體中和Cm感染小鼠內(nèi)源性IL-17，計數(shù)其支氣管肺泡灌洗液中的PMN數(shù)量，分析確定在小鼠Cm呼吸道感染過程中PMN浸潤與有IL-17產(chǎn)生的相關(guān)性;利用RT-PCR技術(shù)，檢測Cm感染小鼠肺組織與PMN浸潤相關(guān)的活性分子mRNA的表達水平，包括:粘附分子ICAM-1、選擇素E-selectin、P-selectin、L-selectin，Toll樣受體TLR2、TLR4及MyD88，前炎性細胞因子IL-1β

4、、IL-6、TNF-α及趨化因子MIP-2、LIX、KC、MCP-1。
　　結(jié)果:
　　Cm呼吸道感染誘導C57小鼠衣原體肺炎，小鼠體重下降，肺組織大量衣原體生長（IFU增高）。與未感染對照組（第0天）比較，Cm感染誘導大量PMN在肺組織募集，PMN數(shù)量、百分率及活性明顯增高，髓過氧化物酶MPO的含量也顯著增高，炎癥并于感染后第7天達到最高峰。Cm呼吸道感染誘導IL-17在肺組織的表達及分泌。與給予抗鼠IL-17同型抗體Ig

5、G2a的對照組比較，IL-17中和小鼠肺組織PMN的浸潤水平顯著降低，肺泡支氣管灌洗液PMN的數(shù)量減少，相關(guān)性分析結(jié)果顯示Cm呼吸道感染中肺組織IL-17的分泌水平與PMN的浸潤呈正相關(guān)。同時，Cm呼吸道感染的C57小鼠，肺組織中與PMN浸潤相關(guān)的活性分子:粘附分子ICAM-1、選擇素E-selectin、P-selectin、L-selectin，Toll樣受體TLR2、TLR4及MyD88，前炎性細胞因子IL-1β、IL-6、TNF