IL-1β干預(yù)下TRAF6在牙周膜成纖維細(xì)胞中表達(dá)的研究.pdf

1、目的： 原代培養(yǎng)人牙周膜成纖維細(xì)胞，建立人牙周膜成纖維細(xì)胞的體外模型；觀察在不同濃度組的IL-1β干預(yù)下，腫瘤壞死因子受體相關(guān)因子6(TRAF6)在人牙周膜成纖維細(xì)胞中的表達(dá)狀況，為細(xì)胞因子網(wǎng)絡(luò)對(duì)細(xì)胞功能的調(diào)控提供新資料。 方法： 利用組織塊培養(yǎng)法對(duì)人牙周膜成纖維細(xì)胞進(jìn)行體外分離培養(yǎng)，并對(duì)其進(jìn)行形態(tài)學(xué)及免疫組織化學(xué)鑒定。選取5～8代生長穩(wěn)定的人牙周膜成纖維細(xì)胞，分別以0ng/ml、0.1ng/ml、0.5ng/m

2、l、1ng/ml、5ng/ml、10ng/ml的IL-1β對(duì)細(xì)胞進(jìn)行干預(yù)，采用逆轉(zhuǎn)錄多聚酶鏈反應(yīng)法及免疫組織化學(xué)方法檢測(cè)TRAF6在細(xì)胞中的表達(dá)狀況，利用計(jì)算機(jī)圖像分析系統(tǒng)對(duì)檢測(cè)結(jié)果進(jìn)行圖像及數(shù)據(jù)的采集，并對(duì)實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)采用單因素方差分析法進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，觀察TRAF6在不同濃度的IL-1β干預(yù)下在細(xì)胞中的定位及表達(dá)特點(diǎn)。 結(jié)果： (1)人牙周膜成纖維細(xì)胞培養(yǎng)并傳代成功，5代后細(xì)胞生長穩(wěn)定，倒置顯微鏡下觀察，細(xì)胞為星形或長梭形

3、，為典型的成纖維樣細(xì)胞形態(tài)：免疫組織化學(xué)染色觀察，細(xì)胞抗波形絲蛋白染色陽性，抗角蛋白染色陰性，符合人牙周膜成纖維細(xì)胞的生物學(xué)特性。 (2)RT-PCR及免疫組化結(jié)果顯示：在基因及蛋白水平上，TRAF6在正常的人牙周膜成纖維細(xì)胞中未見陽性表達(dá)，而在IL-1β干預(yù)后的細(xì)胞中可見胞漿表達(dá)陽性，且其表達(dá)強(qiáng)度隨IL-1β干預(yù)濃度的升高呈現(xiàn)增強(qiáng)的趨勢(shì)。 結(jié)論： (1)組織塊培養(yǎng)法培養(yǎng)細(xì)胞步驟簡(jiǎn)單易掌握，培養(yǎng)出的細(xì)胞符合牙周膜