IL-6、IL-10對(duì)EGF體外誘導(dǎo)人牙齦成纖維細(xì)胞上皮化的影響.pdf

1、目的:
　　 外傷、皮膚黏膜病、放射性因素以及各種生化因素等導(dǎo)致的上皮損傷，往往伴隨著組織的嚴(yán)重缺損，依靠自身的恢復(fù)能力難以恢復(fù)到正常的組織結(jié)構(gòu)和功能狀態(tài)，快速的創(chuàng)面再上皮化是減少創(chuàng)面感染和提高患者救治成功率的關(guān)鍵。目前組織工程為上皮缺損修復(fù)開辟了新途徑，已有研究證明大鼠骨髓MSC經(jīng)誘導(dǎo)后可以表達(dá)上皮特異性蛋白-角蛋白。但MSC的獲取較難。
　　 目前研究發(fā)現(xiàn):牙齦成纖維細(xì)胞自我更新能力活躍，在牙周、牙齦組織的保護(hù)和修復(fù)

2、中起重要作用。最近發(fā)現(xiàn)的牙齦間充質(zhì)干細(xì)胞具有易取材，增殖快，有成骨、成脂肪、成軟骨細(xì)胞等多向分化的能力，表明牙齦成纖維細(xì)胞中可能儲(chǔ)存有部分干細(xì)胞特性的細(xì)胞，因此牙齦成纖維細(xì)胞有望成為組織損傷修復(fù)的相對(duì)理想的種子細(xì)胞。
　　 為探討牙齦成纖維細(xì)胞作為組織工程的種子細(xì)胞應(yīng)用于上皮損傷修復(fù)的可能性，本次實(shí)驗(yàn)采用表皮細(xì)胞生長因子(EGF)誘導(dǎo)法誘導(dǎo)牙齦成纖維細(xì)胞向上皮細(xì)胞轉(zhuǎn)化，同時(shí)在條件培養(yǎng)基中加入一定濃度的IL-6、IL-10初步模擬

3、炎性環(huán)境，探討炎癥因子對(duì)牙齦成纖維細(xì)胞上皮化的影響，檢測(cè)牙齦成纖維細(xì)胞向上皮細(xì)胞轉(zhuǎn)化的潛力，以及不同炎癥環(huán)境對(duì)其轉(zhuǎn)化效率的影響，以期為將牙齦成纖維細(xì)胞引入創(chuàng)傷修復(fù)的治療提供一定的實(shí)驗(yàn)支持。
　　 方法:
　　 1.組織塊法體外培養(yǎng)人牙齦成纖維細(xì)胞，傳代培養(yǎng)至第4～7代，細(xì)胞免疫化學(xué)法檢測(cè)其角蛋白及波形蛋白表達(dá)。
　　 2.傳代培養(yǎng)牙齦成纖維細(xì)胞至4～7代，調(diào)整細(xì)胞密度0.5×106/L，配制條件培養(yǎng)基（含10μg

4、/L EGF、2％胎牛血清、1％雙抗的EpicM培養(yǎng)基），設(shè)置分別加入10μg/L IL-6、10μg/L IL-10的條件培養(yǎng)基，用于誘導(dǎo)培養(yǎng);對(duì)照組為完全培養(yǎng)基（含10％FBS、1％雙抗的α-DMEM培養(yǎng)基），誘導(dǎo)期為4天。細(xì)胞免疫化學(xué)法及免疫熒光染色法檢測(cè)角蛋白以及波形蛋白的表達(dá)，流式細(xì)胞儀法定量檢測(cè)角蛋白表達(dá)率。
　　 結(jié)果:
　　 1.約4天左右，細(xì)胞開始從組織塊周圍爬出，一個(gè)半月左右細(xì)胞可傳至第3代，鏡下觀察

5、細(xì)胞狀態(tài)良好，形態(tài)穩(wěn)定，均一，雜質(zhì)細(xì)胞少，細(xì)胞純度較高，滿足進(jìn)一步實(shí)驗(yàn)的條件。細(xì)胞免疫化學(xué)法檢測(cè)見角蛋白表達(dá)陰性波形蛋白陽性表達(dá)。
　　 2.誘導(dǎo)培養(yǎng)4天后，細(xì)胞免疫化學(xué)染色EGF組、EGF+IL-6組、EGF+IL-10組均可見上皮細(xì)胞標(biāo)志蛋白角蛋白的陽性表達(dá)，波形蛋白表達(dá)陽性;免疫熒光染色顯示，各實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞角蛋白熒光表達(dá)陽性的同時(shí)，波形蛋白熒光表達(dá)也呈陽性，但相同曝光度下角蛋白熒光表達(dá)強(qiáng)度較波形蛋白強(qiáng)度弱，對(duì)照組角蛋白表達(dá)陰

6、性，波形蛋白表達(dá)陽性。流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)各組細(xì)胞角蛋白表達(dá)率分別為條件培養(yǎng)基(EGF)組72.5％、條件培養(yǎng)基+IL-6誘導(dǎo)組（EGF+IL-6）91.9％、條件培養(yǎng)基+IL-10誘導(dǎo)組(EGF+IL-10)86.3％、對(duì)照組68.9％。
　　 結(jié)論:
　　 實(shí)驗(yàn)表明人牙齦成纖維細(xì)胞體外培養(yǎng)具有易取材、增殖快、形態(tài)穩(wěn)定的特點(diǎn)。牙齦成纖維細(xì)胞在一定濃度EGF存在下可以被誘導(dǎo)表達(dá)角蛋白，具有向上皮細(xì)胞轉(zhuǎn)化的潛能。炎性細(xì)胞因子IL