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文檔簡介
1、本文以脂質體介導法轉染綿羊胎兒成纖維細胞(sFFCs),尋找影響脂質體介導轉染sFFCs效率的因素,以期提高轉染效率,為轉基因綿羊生物反應器打下基礎。 首先成功建立了30天綿羊胎兒成纖維細胞培養(yǎng)體系及優(yōu)化的轉染方法,在此基礎上sFFCs能傳代至F<,30>,pNIGBA質粒轉染率可達到46%。根據建系要求,對sFFCs的生物學性狀進行分析結果如下: 1.培養(yǎng)細胞形態(tài)為典型的成纖維狀,可根據對胰蛋白酶的敏感度不同,將其純化
2、。 2.綿羊胎兒成纖維細胞的生長曲線均呈“S”型,細胞經歷了潛伏期、指數生長期和平臺期。 3.細胞冷凍實驗結果顯示,綿羊胎兒成纖維細胞用DMSO(10%)冷凍,細胞存活狀態(tài)良好,說明本研究中所采用冷凍保護劑適合于sFFCs的長期冷凍保存。 4.染色體核型分析綿羊的二倍體染色體數目為2n=54,在本研究培育體系中能保持二倍體性狀,遺傳性狀穩(wěn)定,可以使綿羊遺傳資源在細胞水平長久保持下來。 5.Lipofect
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