小鼠成纖維細(xì)胞向內(nèi)皮細(xì)胞轉(zhuǎn)分化的體外研究.pdf

1、背景:
　　干細(xì)胞治療是一種新興的心肌缺血損傷后修復(fù)的再生醫(yī)學(xué)治療模式。然而，干細(xì)胞在體外擴(kuò)增后移植到缺血心臟，面臨移植所致心律失常、多能干細(xì)胞在體定向分化不可控、致瘤風(fēng)險(xiǎn)以及干細(xì)胞的遠(yuǎn)期存活率低等問(wèn)題。近年來(lái)發(fā)現(xiàn)并完善的轉(zhuǎn)分化策略，有望從一定程度上解決上述問(wèn)題。轉(zhuǎn)分化依賴于特異性的轉(zhuǎn)錄因子或化學(xué)誘導(dǎo)實(shí)現(xiàn)體細(xì)胞譜系轉(zhuǎn)變，繞過(guò)了多能性狀態(tài)，相對(duì)高效和安全。但該方法本身無(wú)法避免病毒載體轉(zhuǎn)染引起的基因修飾，限制了該方法獲得期望的細(xì)胞類型

2、及其產(chǎn)品的治療性應(yīng)用。而小分子因?yàn)槠淇焖?、方便使用、無(wú)外源基因整合、效應(yīng)可逆等特點(diǎn)在轉(zhuǎn)分化中是一種替代譜系特異性轉(zhuǎn)錄因子的較好的選擇。但由于小分子在重編程中的應(yīng)用是一個(gè)新興的、發(fā)展的話題，迄今為止，心血管領(lǐng)域相關(guān)小分子策略的研究都是孤立的、前驅(qū)性的，其在轉(zhuǎn)分化中的作用機(jī)制及分子路線圖有待于未來(lái)進(jìn)一步闡明，更多的研究需要去驗(yàn)證目前的發(fā)現(xiàn)和評(píng)估只使用小分子的完全化學(xué)轉(zhuǎn)分化來(lái)產(chǎn)生不同譜系細(xì)胞類型的可能性。因此，本實(shí)驗(yàn)研究旨在模擬急性心肌梗死環(huán)

3、境，調(diào)查血清剝奪刺激是否可以激活心肌成纖維細(xì)胞向內(nèi)皮細(xì)胞轉(zhuǎn)分化。
　　方法:
　　我們?nèi)57/BL新生小鼠（出生1-3天）新鮮分離心臟組織，獲取成纖維細(xì)胞進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng)，用淋巴細(xì)胞抑制因子(LIF)促進(jìn)成纖維細(xì)胞自我更新、長(zhǎng)程維持干性和抑制其向終末分化。將第3代的成纖維細(xì)胞分為5組:對(duì)照組(DMEM+10％FBS)血清饑餓24h組(DMEM+0％FBS)、血清饑餓48h組(DMEM+0％FBS)、血清饑餓72h組(DMEM+

4、0％FBS)、血清饑餓48小時(shí)且不添加LIF(DMEM+0％FBS)。各組細(xì)胞在不同處理后，分別采用qPCR法、體外血管生成試驗(yàn)和Dil標(biāo)記-乙酰化低密度脂蛋白（Dil-Ac-LDL）吞噬功能試驗(yàn)來(lái)檢測(cè)細(xì)胞譜系特異性基因變化、體外血管新生能力和內(nèi)皮細(xì)胞標(biāo)記性的功能，采用ELISA的方法檢測(cè)血清饑餓后成纖維細(xì)胞分泌VEGF的情況。
　　結(jié)果:血清饑餓組內(nèi)皮細(xì)胞特異性基因CD31陽(yáng)性表達(dá)的細(xì)胞是對(duì)照組的22倍，ve-herin陽(yáng)性表達(dá)

5、的細(xì)胞是對(duì)照組的50倍，P＜0.05。經(jīng)歷3個(gè)不同的時(shí)間的血清饑餓刺激后，血清饑餓48小時(shí)組內(nèi)皮基因提高最明顯，是血清饑餓72小時(shí)組的7.7倍，P＜0.05。和對(duì)照組比較，血清饑餓24小時(shí)組ve-herin表達(dá)無(wú)顯著提高，P＞0.05。此外，F(xiàn)bs獲得了一定的內(nèi)皮細(xì)胞的功能，和對(duì)照組相比，倒置熒光顯微鏡下觀察血清剝奪組Fbs形成微血管結(jié)構(gòu)和分泌VEGF的能力顯著提高。
　　結(jié)論:
　　血清剝奪刺激可以激活心肌成纖維細(xì)胞向內(nèi)皮