VEGF基因修飾后人脂肪干細胞上清對成纖維細胞及內(nèi)皮細胞的影響.pdf

1、研究背景：慢性創(chuàng)面患者人數(shù)的增加已成為一個重要的社會和經(jīng)濟問題，人脂肪干細胞（HADSCs）可以分泌多種生長因子并可用于創(chuàng)面治療，現(xiàn)我們試圖通過慢病毒攜帶血管內(nèi)皮生長因子（VEGF）基因轉(zhuǎn)染于HADSCs，獲得VEGF的穩(wěn)定分泌。
　　目的：為探索一種有效的創(chuàng)面治療方法，我們使用慢病毒攜帶 VEGF基因修飾HADSCs，檢測其上清液中VEGF的表達，并用其上清液作用于創(chuàng)面愈合關(guān)鍵細胞，觀察其對人皮膚成纖維細胞（HDFs）及人臍靜脈

2、內(nèi)皮細胞（HUVECs）增殖、遷移的影響。
　　材料及方法：1、通過膠原酶消化法從人脂肪中提取HADSCs，經(jīng)流式細胞儀檢測其表面標(biāo)志物，并進行成脂、成骨、成軟骨多向誘導(dǎo)；2、將攜帶VEGF基因的慢病毒轉(zhuǎn)染于HADSCs，以GFP作為報告基因分析轉(zhuǎn)染效率，并定時收集上清液，通過ELISA法檢測上清中蛋白分泌情況。3、將不同組HADSCs-CM作用于HDFs及HUVECs，通過CCK-8法檢測細胞增殖，劃痕法檢測細胞遷移能力。

3、>　　結(jié)果：1、經(jīng)過0.1％的Ⅰ型膠原酶消化法可方便、有效地提取出 HADSCs，經(jīng)流式鑒定顯示CD90、CD29、CD44、CD105為（+），CD45、CD106為（-），并可成功多向誘導(dǎo)。2、通過GFP熒光可觀察，發(fā)現(xiàn)VEGF可穩(wěn)定轉(zhuǎn)染于HADSCs，ELISA結(jié)果顯示其 VEGF及 bFGF分泌提高并維持在較高水平。3、當(dāng)完全培養(yǎng)基混合與VEGF-HADSCs-CM以1:2的比例混合時對成纖維細胞及內(nèi)皮細胞的增殖及遷移有明顯的促