調(diào)節(jié)角質(zhì)形成細(xì)胞中的Notch信號(hào)對(duì)成纖維細(xì)胞活性的影響.pdf

1、目的:
　　探討在復(fù)合培養(yǎng)的條件下,通過(guò)調(diào)節(jié)角質(zhì)形成細(xì)胞中的Notch信號(hào),了解其對(duì)成纖維細(xì)胞增殖能力、以及分泌細(xì)胞外基質(zhì)和細(xì)胞因子的影響。
　　方法:
　　在誘導(dǎo)角質(zhì)形成細(xì)胞終末分化的過(guò)程中,用Jagged-1或者γ-分泌酶抑制劑DAPT進(jìn)行預(yù)處理,調(diào)控角質(zhì)形成細(xì)胞中的Notch信號(hào),然后通過(guò)血清刺刺激和提升至氣液交界面使其達(dá)到復(fù)層生長(zhǎng)和終末分化,后與成纖維細(xì)胞共培養(yǎng)。首先,在復(fù)合培養(yǎng)前,即誘導(dǎo)角質(zhì)形成細(xì)胞分化的過(guò)程

2、中,通過(guò)real-timePCR檢測(cè)Notch信號(hào)受體Notc-1、相應(yīng)配體Jagged-1、下游調(diào)控基因p21和p63的表達(dá),明確Notch信號(hào)是否活化。其次,通過(guò)將調(diào)節(jié)Notch信號(hào)后的角質(zhì)形成細(xì)胞與成纖維細(xì)胞復(fù)合培養(yǎng),細(xì)胞計(jì)數(shù)檢測(cè)成纖維細(xì)胞增殖能力、real-timePCR和ELISA分別從mRNA和蛋白質(zhì)水平檢測(cè)成纖維細(xì)胞合成和分泌的Collagen-1、Fibronectin、KGF和細(xì)胞因子的表達(dá)。
　　結(jié)果:

3、　　用Fc段和DMSO分別對(duì)角質(zhì)形成細(xì)胞進(jìn)行預(yù)處理,檢測(cè)其Notch信號(hào)下游分子p21和p63的表達(dá),與Blank組相比,均未見明顯異常(P>0.05)。而用Jagged-1對(duì)角質(zhì)形成細(xì)胞進(jìn)行預(yù)處理,檢測(cè)p21和p63、以及Notch信號(hào)受體Notch-1和相應(yīng)配體Jagged-1在角質(zhì)形成細(xì)胞中的表達(dá),均發(fā)現(xiàn)Notch信號(hào)明顯活化。用DAPT對(duì)角質(zhì)形成細(xì)胞進(jìn)行預(yù)處理,結(jié)果表明:相對(duì)于Blank組,DAPT組角質(zhì)形成細(xì)胞中Notch信號(hào)

4、受到抑制。分別對(duì)復(fù)合培養(yǎng)后第1天、第3天和第5天的成纖維細(xì)胞進(jìn)行檢測(cè),發(fā)現(xiàn)Notch信號(hào)活化的Jagged-1組的角質(zhì)形成細(xì)胞能夠明顯促進(jìn)與其共培養(yǎng)的成纖維細(xì)胞的增殖、分泌Collagen-1、Fibronectin、KGF、以及TGF-β1的合成(P<0.05)。而在Notch信號(hào)被抑制的DAPT組,成纖維細(xì)胞的增殖能力與Blank組對(duì)比雖無(wú)明顯差別(P>0.05),但其分泌Collagen-1、Fibronectin、KGF和TGF