陰道植入物對成纖維細胞增殖和蛋白合成的影響.pdf

1、目的：不同網(wǎng)片對盆底功能障礙性疾病患者的陰道前壁成纖維細胞增值、膠原蛋白合成的影響。
　　方法：選擇2013年3月~2013年5月在南京軍區(qū)福州總院婦產(chǎn)科行盆底重建術(shù)的患者5例作為研究對象。術(shù)中切取的陰道前壁組織，組織塊培養(yǎng)法于體外行陰道前壁成纖維細胞原代培養(yǎng)。倒置顯微鏡觀察細胞形態(tài)，用抗波形蛋白抗體和抗角蛋白抗體進行免疫組織化學染色法鑒定成纖維細胞。將培養(yǎng)至第4~6代成纖維細胞分為4組，分別為加入Prolift網(wǎng)片（Prolif

2、t組）、Avaulta網(wǎng)片（Avaulta組）、TVT-O網(wǎng)片（TVT-O組）及不加網(wǎng)片（正常對照組），采用四甲基偶氮唑藍比色法（MTT法）檢測4組培養(yǎng)第2、4、7天時的細胞增殖情況，采用Western bolt法檢測成纖維細胞與網(wǎng)片共培養(yǎng)第4天時成纖維細胞分泌Ⅰ、Ⅲ型膠原蛋白情況。
　　結(jié)果：1.用陰道前壁筋膜組織行組織塊法培養(yǎng)可成功獲得大量原代的成纖維細胞，此法取材方便，過程簡單，成纖維細胞于體外培養(yǎng)時增殖活躍。用倒置顯微鏡觀

3、察細胞形態(tài)：細胞貼壁生長，體積較大，多突起，呈紡錘形或星形，細胞核呈規(guī)則的卵圓形，多核仁。待所培養(yǎng)的細胞傳至第4代后用抗波形蛋白抗體和抗角蛋白抗體進行免疫組織化學染色后，細胞抗波形蛋白抗體陽性，抗角蛋白抗體陰性，可證實為成纖維細胞。
　　2.細胞增殖實驗(MTT法)：加入網(wǎng)片后培養(yǎng)2天時，正常對照組、Prolift組、Avaulta組和TVT-O組吸光值分別為（0.790±0.023），(0.655±0.017)，(0.644±0

4、.022)和(0.538±0.067)；培養(yǎng)4天時，相應組的吸光值分別為（0.843±0.014），(0.716±0.045)，(0.673±0.025)和(0.283±0.008)；培養(yǎng)7天時分別為（2.040±0.035），(1.201±0.126)，(1.109±0.087)和(0.196±0.017)。正常對照組測得各時期的吸光度值均高于相應時期的三個網(wǎng)片組，經(jīng)分別比較，差異均具有統(tǒng)計學意義(P<0.05)，表明三種網(wǎng)片對成纖維

5、細胞增殖均有影響。成纖維細胞分別與三種不同的網(wǎng)片共培養(yǎng)2天時，Prolift組吸光度值稍高于Avaulta組和TVT-O組，但經(jīng)組間分別兩兩比較，差異均無統(tǒng)計學意義(P>0.05)；培養(yǎng)第4天和第7天時，Prolift組和Avaulta組吸光值均明顯高于TVT-O組，分別比較，差異均具有統(tǒng)計學意義(P<0.05)；Prolift組、Avaulta組各期之間的吸光度值相仿，差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。
　　3.Western

6、blot法：加入網(wǎng)片后培養(yǎng)4天時，正常對照組、Prolift組、Avaulta組和TVT-O組I型膠原蛋白表達量分別為（7.801±0.253），(5.421±0.191)，(5.274±0.195)和(4.041±0.154)；Ⅲ型膠原蛋白表達量分別為（1.062±0.104），(0.870±0.051)，(0.865±0.047)和(0.651±0.073)。正常對照組與 Prolift組、Avaulta組和TVT-O組之間的I型和

7、Ⅲ型膠原蛋白分別兩兩比較，差異均有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)；其中Prolift組和Avaulta組的Ⅰ型和Ⅲ型膠原蛋白分別比較，差異無統(tǒng)計學意義(P＞0.05)，但Prolift組、Avaulta組中的Ⅰ型、Ⅲ型膠原蛋白分別與TVT-O組進行比較，差異均有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。
　　結(jié)論：l.應用組織塊法體外培養(yǎng)盆底功能障礙性疾病患者的陰道壁成纖維細胞，可獲得大量的原代成纖維細胞，增殖良好。
　　2.三種聚丙烯網(wǎng)片對