Transwell小室環(huán)境下人脂肪干細胞對不同年齡成纖維細胞功能的影響.pdf

1、目的：研究在Transwell小室環(huán)境條件下，ADSCs分別對青年人和老年人來源成纖維細胞功能的影響及其差異，為脂肪干細胞運用于抗衰老奠定實驗基礎。
　　方法：
　　1.從擇期手術中獲得廢棄的人體皮下脂肪組織，分離并培養(yǎng)成人ADSCs，顯微鏡觀察ADSCs的形態(tài)特征。
　　2.選取生長狀態(tài)良好的第三代ADSCs用流式細胞儀FCM進行細胞表面抗原鑒定。
　　3.從擇期手術中獲得廢棄的青年人（＜25歲）和老年人(＞6

2、0歲)皮膚組織，分別分離培養(yǎng)成纖維細胞，顯微鏡觀察成纖維細胞的形態(tài)特征。
　　4.將ADSCs分別和青年人以及老年人成纖維細胞進行間接共培養(yǎng)，同時以非共培養(yǎng)的青年人以及老年人成纖維細胞作為空白對照，顯微鏡觀察共培養(yǎng)后成纖維細胞的形態(tài)變化。。
　　5.MTT檢測共培養(yǎng)后成纖維細胞的增殖情況。
　　6.RT-PCR檢測共培養(yǎng)后成纖維細胞的Ⅰ型膠原、MMP-1、β-半乳糖苷酶的mRNA表達。
　　結果：
　　1.

3、FCM檢測ADSCs細胞表面抗原結果:CD44，CD90陽性表達，CD34陰性表達。
　　2.ADSCs形態(tài)特征:ADSCs細胞呈長梭形，原代細胞生長較慢，傳代后生長速度加快，傳至3代后鏡下可見細胞呈“旋渦狀”分布。
　　3.共培養(yǎng)后老年人和青年人成纖維細胞形態(tài)特征:老年人成纖維細胞體積較大，形狀不規(guī)則，呈多突起的扁平星狀;共培養(yǎng)后則逐漸轉變?yōu)殚L梭型。青年人成纖維細胞形狀規(guī)則，多呈長梭型;共培養(yǎng)后形態(tài)無明顯變化。
　　

4、4.MTT法測定成纖維細胞增殖結果:共培養(yǎng)后老年人和青年人實驗組成纖維細胞增殖分別高于老年人和青年人對照組成纖維細胞(P=0.000)，且青年人實驗組增殖高于老年人實驗組(P=0.000)。
　　5.RT-PCR檢測各組成纖維細胞Ⅰ型膠原，MMP-1，β-半乳糖苷酶mRNA表達結果:(1)共培養(yǎng)后老年人和青年人實驗組成纖維細胞增殖分別高于老年人和青年人對照組成纖維細胞(P=0.000)，且青年人實驗組增殖高于老年人實驗組(P=0.

5、000)。(2)共培養(yǎng)后老年人和青年人實驗組成纖維細胞的Ⅰ型膠原和β-半乳糖苷酶mRNA表達分別高于老年人和青年人對照組成纖維細胞(P=0.000)，且青年人實驗組的Ⅰ型膠原和β-半乳糖苷酶mRNA表達均高于老年人實驗組(P=0.002、P=0.000)。(3)共培養(yǎng)后老年人和青年人實驗組成纖維細胞的MMP-1mRNA表達分別低于老年人和青年人對照組成纖維細胞(P=0.000)，青年人實驗組的MMP-1 mRNA表達低于青年人實驗組(P

6、=0.055)，該差異無統(tǒng)計學意義，此結果的產生可能與共培養(yǎng)后青年人成纖維細胞和老年人成纖維細胞增殖均較活躍，產生的MMP-1均較少有關。
　　結論：
　　1.ADSCs原代細胞生長較慢，傳代后生長速度加快，傳代后的ADSCs經表面抗原檢測后純度較高。
　　2.青年人成纖維細胞呈長梭形，細胞生長速度較快;老年人成纖維細胞形態(tài)不規(guī)則，呈長梭形或粗大條索形，細胞質內有深色顆粒狀物質沉積，細胞生長速度較慢。
　　3.A