Transwell小室環(huán)境下人脂肪干細(xì)胞對(duì)不同年齡成纖維細(xì)胞功能的影響.pdf

1、目的：研究在Transwell小室環(huán)境條件下，ADSCs分別對(duì)青年人和老年人來(lái)源成纖維細(xì)胞功能的影響及其差異，為脂肪干細(xì)胞運(yùn)用于抗衰老奠定實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。
　　方法：
　　1.從擇期手術(shù)中獲得廢棄的人體皮下脂肪組織，分離并培養(yǎng)成人ADSCs，顯微鏡觀察ADSCs的形態(tài)特征。
　　2.選取生長(zhǎng)狀態(tài)良好的第三代ADSCs用流式細(xì)胞儀FCM進(jìn)行細(xì)胞表面抗原鑒定。
　　3.從擇期手術(shù)中獲得廢棄的青年人（＜25歲）和老年人(＞6

2、0歲)皮膚組織，分別分離培養(yǎng)成纖維細(xì)胞，顯微鏡觀察成纖維細(xì)胞的形態(tài)特征。
　　4.將ADSCs分別和青年人以及老年人成纖維細(xì)胞進(jìn)行間接共培養(yǎng)，同時(shí)以非共培養(yǎng)的青年人以及老年人成纖維細(xì)胞作為空白對(duì)照，顯微鏡觀察共培養(yǎng)后成纖維細(xì)胞的形態(tài)變化。。
　　5.MTT檢測(cè)共培養(yǎng)后成纖維細(xì)胞的增殖情況。
　　6.RT-PCR檢測(cè)共培養(yǎng)后成纖維細(xì)胞的Ⅰ型膠原、MMP-1、β-半乳糖苷酶的mRNA表達(dá)。
　　結(jié)果：
　　1.

3、FCM檢測(cè)ADSCs細(xì)胞表面抗原結(jié)果:CD44，CD90陽(yáng)性表達(dá)，CD34陰性表達(dá)。
　　2.ADSCs形態(tài)特征:ADSCs細(xì)胞呈長(zhǎng)梭形，原代細(xì)胞生長(zhǎng)較慢，傳代后生長(zhǎng)速度加快，傳至3代后鏡下可見(jiàn)細(xì)胞呈“旋渦狀”分布。
　　3.共培養(yǎng)后老年人和青年人成纖維細(xì)胞形態(tài)特征:老年人成纖維細(xì)胞體積較大，形狀不規(guī)則，呈多突起的扁平星狀;共培養(yǎng)后則逐漸轉(zhuǎn)變?yōu)殚L(zhǎng)梭型。青年人成纖維細(xì)胞形狀規(guī)則，多呈長(zhǎng)梭型;共培養(yǎng)后形態(tài)無(wú)明顯變化。
　　

4、4.MTT法測(cè)定成纖維細(xì)胞增殖結(jié)果:共培養(yǎng)后老年人和青年人實(shí)驗(yàn)組成纖維細(xì)胞增殖分別高于老年人和青年人對(duì)照組成纖維細(xì)胞(P=0.000)，且青年人實(shí)驗(yàn)組增殖高于老年人實(shí)驗(yàn)組(P=0.000)。
　　5.RT-PCR檢測(cè)各組成纖維細(xì)胞Ⅰ型膠原，MMP-1，β-半乳糖苷酶mRNA表達(dá)結(jié)果:(1)共培養(yǎng)后老年人和青年人實(shí)驗(yàn)組成纖維細(xì)胞增殖分別高于老年人和青年人對(duì)照組成纖維細(xì)胞(P=0.000)，且青年人實(shí)驗(yàn)組增殖高于老年人實(shí)驗(yàn)組(P=0.

5、000)。(2)共培養(yǎng)后老年人和青年人實(shí)驗(yàn)組成纖維細(xì)胞的Ⅰ型膠原和β-半乳糖苷酶mRNA表達(dá)分別高于老年人和青年人對(duì)照組成纖維細(xì)胞(P=0.000)，且青年人實(shí)驗(yàn)組的Ⅰ型膠原和β-半乳糖苷酶mRNA表達(dá)均高于老年人實(shí)驗(yàn)組(P=0.002、P=0.000)。(3)共培養(yǎng)后老年人和青年人實(shí)驗(yàn)組成纖維細(xì)胞的MMP-1mRNA表達(dá)分別低于老年人和青年人對(duì)照組成纖維細(xì)胞(P=0.000)，青年人實(shí)驗(yàn)組的MMP-1 mRNA表達(dá)低于青年人實(shí)驗(yàn)組(P

6、=0.055)，該差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，此結(jié)果的產(chǎn)生可能與共培養(yǎng)后青年人成纖維細(xì)胞和老年人成纖維細(xì)胞增殖均較活躍，產(chǎn)生的MMP-1均較少有關(guān)。
　　結(jié)論：
　　1.ADSCs原代細(xì)胞生長(zhǎng)較慢，傳代后生長(zhǎng)速度加快，傳代后的ADSCs經(jīng)表面抗原檢測(cè)后純度較高。
　　2.青年人成纖維細(xì)胞呈長(zhǎng)梭形，細(xì)胞生長(zhǎng)速度較快;老年人成纖維細(xì)胞形態(tài)不規(guī)則，呈長(zhǎng)梭形或粗大條索形，細(xì)胞質(zhì)內(nèi)有深色顆粒狀物質(zhì)沉積，細(xì)胞生長(zhǎng)速度較慢。
　　3.A