不同年齡段、不同取材部位大鼠脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞生物學(xué)特性的對(duì)比研究.pdf

1、研究背景及目的：
　　成體間充質(zhì)干細(xì)胞(mesenchymal stem cells,MSCs)具有多向分化能力,研究證實(shí)MSCs可分化為胃腸道上皮細(xì)胞,有望通過移植MSCs來修復(fù)損傷的胃黏膜上皮組織,恢復(fù)黏膜原有的防御屏障功能并提高潰瘍愈合質(zhì)量(quality of ulcer healing,QOUH),從而達(dá)到治療并防止消化性潰瘍(pepticulcer,PU)復(fù)發(fā)的目的。國外有研究采用骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(bone marro

2、w derived stem cell,BSCs)治療胃潰瘍(gastric ulcer,GU)并取得了令人鼓舞的結(jié)果,證實(shí)了通過移植BSCs可加速潰瘍的愈合。然而,由于BSCs的數(shù)量少,僅占骨髓有核細(xì)胞的0.001％～0.01%,并且獲取骨髓組織時(shí)創(chuàng)傷性大,這使得BSCs的臨床應(yīng)用前景受到了限制。脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞(adipose-derived stromal cells,ASCs)作為其中一種MSCs,具有細(xì)胞數(shù)量大、取材創(chuàng)傷性小、

3、可上皮細(xì)胞分化、無免疫排斥反應(yīng)等優(yōu)點(diǎn)。利用ASCs移植治療GU,有可能會(huì)成為一種新穎、有效的治療手段。本研究旨在觀察SD大鼠ASCs的生物學(xué)特點(diǎn)與不同年齡、不同取材部位的關(guān)系,為ASCs移植胃潰瘍治療的實(shí)驗(yàn)尋找理想的種子細(xì)胞提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
　　方法：
　　SD大鼠,雌、雄不限,分為1月齡(幼齡組)和12月齡(成年組)兩種,取腹腔大網(wǎng)膜脂肪組織或腹股溝脂肪組織進(jìn)行分離、培養(yǎng)與鑒定。隨機(jī)分為4組:A組為取材于腹腔大網(wǎng)膜脂肪組織的

4、1月齡SD大鼠;B組為取材于腹股溝脂肪組織的1月齡SD大鼠;C組為取材于腹腔大網(wǎng)膜脂肪組織的12月齡SD大鼠;D組為取材于腹股溝脂肪組織的12月齡SD大鼠;以Ⅰ型膠原酶消化脂肪組織后提取ASCs進(jìn)行貼壁培養(yǎng),相差顯微鏡下觀察ASCs的形態(tài),繪制細(xì)胞生長曲線,并用流式細(xì)胞術(shù)鑒定第四代ASCs的表面標(biāo)志物CD29,CD45,CD90的表達(dá)率。
　　結(jié)果：
　　1、四組SD大鼠培養(yǎng)出的細(xì)胞均貼壁生長,以梭形為主,部分呈星形或多角形

5、,符合間充質(zhì)干細(xì)胞形態(tài)特征,各組原代細(xì)胞與傳代細(xì)胞在形態(tài)學(xué)上無明顯差異。
　　2、四組SD大鼠第4代ASCs的生長曲線均呈S型;ASCs生長的潛伏期、進(jìn)入平臺(tái)期時(shí)間在四組間差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。
　　3、1月齡組與12月齡組的ASCs在細(xì)胞倍增時(shí)間上差異具有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P<0.01),不同部位間差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。
　　4、第四代ASCs免疫表型結(jié)果:CD29和CD90呈明顯陽性,而CD4

6、5呈明顯陰性,符合間充質(zhì)干細(xì)胞表型特征。三種免疫表型的陽性或陰性表達(dá)率在不同月齡及不同取材部位的四組間差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。
　　結(jié)論：
　　通過酶消化法獲得的SD大鼠的脂肪組織間充質(zhì)干細(xì)胞,細(xì)胞貼壁生長,呈現(xiàn)類似成纖維細(xì)胞樣形態(tài)學(xué)特征,免疫表型顯示CD29和CD90呈陽性,而CD45呈陰性,符合間充質(zhì)干細(xì)胞的特征。1月齡SD大鼠的ASCs的增值活性優(yōu)于12月齡組,腹腔大網(wǎng)膜脂肪組織與腹股溝脂肪組織來源的ASCs