確炎舒松對大鼠骨髓間充質(zhì)干細胞生物學特性的影響.pdf

1、目的:從SD雌性大鼠骨髓中分離培養(yǎng)骨髓間充質(zhì)干細胞，并研究不同濃度確炎舒松對體外培養(yǎng)的骨髓間充質(zhì)干細胞各種生物學特性的影響。
　　 方法:
　　 1.應用全骨髓貼壁法分離培養(yǎng)4周齡雌性SD大鼠骨髓間充質(zhì)干細胞并鑒定。
　　 2.以不同藥物濃度(a:1×10-4mol/L，b:5×10-5mol/L，c:1×10-5mol/L，d:1×10-6mol/L，e:1×10-7mol/L，f:0 mol/L)干預培養(yǎng)，顯

2、微鏡觀察細胞形態(tài)變化。
　　 3.以不同藥物濃度(abcdef)分別加入接種有BMSCs的96孔板中培養(yǎng)，另設一組只加培養(yǎng)基及相應的DMSO，每種濃度設6個復孔，24小時及48小時測定3孔對應吸光度值，分析實驗組與對照組增殖情況。
　　 4.以不同濃度確炎舒松(abcdef)分別加入接種細胞后的六孔板中培養(yǎng)48小時， Annexin V-FITC法檢測細胞凋亡情況，并記錄數(shù)據(jù)。
　　 5.將BMSCs以適當濃度接

3、種于若干六孔板中，()A組加入地塞米松(10-8M/L)+抗壞血酸(50ug/ml)+β磷酸甘油(10mmol/L)，()B組加入確炎舒松（10-6mol/L）+抗壞血酸(50ug/ml)+β磷酸甘油(10mmol/L)，() C組確炎舒松(10-6mol/L)，() D組加入抗壞血酸50ug/ml+β磷酸甘油10mmol/L，()E組不加任何藥物。
　　 每三天換液同時加入各自藥物培養(yǎng)21天，分別提取總RNA，應用RT-PCR

4、擴增OCN及β-actin，并進行電泳，采取圖像進行應用quantity one軟件進行灰度分析。
　　 6.將BMSCs以適當濃度接種于若干六孔板中，分為ABCDE（同上）五組，每三天換液同時加入各自藥物培養(yǎng)21天后進行茜素紅染色，觀察染色結(jié)果并拍照。
　　 結(jié)果:
　　 1.通過流式表面標記物的鑒定及分化能力的檢測表明此次試驗成功培養(yǎng)出大鼠骨髓間充值干細胞。
　　 2.與對照組相比，abcd組各組細胞

5、數(shù)量減少，形態(tài)改變，而e組的數(shù)量及形態(tài)未見明顯不同。
　　 3.各實驗組與對照組進行Dunnett-t檢驗，除E組（培養(yǎng)48小時）組外，余P值均＜0.01，有統(tǒng)計學意義。
　　 4.流式細胞儀凋亡檢測結(jié)果經(jīng)統(tǒng)計學分析，Dunnett-t檢驗，除E組（10-7mol/L）外(P=1)，其余各組與對照組相比都有統(tǒng)計學意義。
　　 5.電泳結(jié)果應用quantity one軟件進行灰度分析（等高線定量法），結(jié)果與對照組（

6、E組）相比， A、B組OCN表達變化與E組相比經(jīng)統(tǒng)計學分析有統(tǒng)計學意義，而C、D組無統(tǒng)計學意義。A、B組BMP-2表達變化與對照組相比有統(tǒng)計學意義，C、D兩組BMP-2變化與對照組相比無統(tǒng)計學意義。
　　 6.ABC三孔茜素紅染色陽性，DE兩組茜素紅染色為陰性。
　　 結(jié)論:
　　 1.本次實驗通過全骨髓貼壁法成功分離培養(yǎng)出骨髓間充質(zhì)干細胞。
　　 2.本次實驗10-6-10-4mol/L確炎舒松干預大鼠