Integrins在間充質(zhì)干細(xì)胞向內(nèi)皮細(xì)胞分化中的作用研究.pdf

1、體內(nèi)外的研究證實(shí)間充質(zhì)于細(xì)胞(MSCs)可以向內(nèi)皮細(xì)胞分化，為血管組織工程提供種子細(xì)胞。實(shí)驗(yàn)室前期工作已證實(shí)VEGF可以誘導(dǎo)骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(BMSCs)向內(nèi)皮細(xì)胞分化。Integrins（整合素）在血管內(nèi)皮細(xì)胞中有高表達(dá)，對血管生成起重要作用。本論文擬研究Integrins在VEGF誘導(dǎo)的骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞向內(nèi)皮細(xì)胞分化及其血管生成過程中的作用。
　　首先用50ng/mL VEGF誘導(dǎo)骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞向內(nèi)皮細(xì)胞分化，利用LDL吸收

2、實(shí)驗(yàn)證實(shí)骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞分化為內(nèi)皮細(xì)胞，能吸收DiI-Ac-LDL;然后通過Matrigel基質(zhì)膠成血管實(shí)驗(yàn)證實(shí)骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的血管生成能力;利用RT-PCR和Westernblot的方法檢測Integrins（Integrinα1、Integrinα5、IntegrinαV、Integrinβ1、Integrinβ4、Integrinβ5）表達(dá)隨著誘導(dǎo)時(shí)間的增長有上升趨勢。
　　前期實(shí)驗(yàn)已證實(shí)Rho信號通路參與VEGF的誘導(dǎo)過

3、程，因此為了驗(yàn)證Integrins是否受到Rho信號通路的調(diào)控，本實(shí)驗(yàn)分別利用兩種Rho信號通路抑制劑2μg/mL C3或10μmol/L Y27632對細(xì)胞進(jìn)行預(yù)處理，然后用VEGF誘導(dǎo)分化。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞不能分化為內(nèi)皮細(xì)胞，且血管生成能力下降，Integrins的表達(dá)下降。
　　已有研究證實(shí)Rho信號通路的活化會(huì)引起MRTF-A入核并激活下游靶基因，為進(jìn)一步確定Integrins是否會(huì)受到MRTF-A的調(diào)控，通過在

4、骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞中分別轉(zhuǎn)染sh-MRTF-A干擾質(zhì)粒和合成的siMRTF-A抑制內(nèi)源性MRTF-A功能，然后用VEGF誘導(dǎo)分化。結(jié)果顯示，干擾MRTF-A組的骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞不能分化為內(nèi)皮細(xì)胞，且血管生成能力下降，Integrins的表達(dá)也下降。利用劃痕實(shí)驗(yàn)和Transwell遷移小室實(shí)驗(yàn)證實(shí)骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的遷移能力下降。進(jìn)一步通過熒光素酶報(bào)告基因分析實(shí)驗(yàn)，證實(shí)MRTF-A對于Integrinα1和Integrinα5啟動(dòng)子有轉(zhuǎn)錄激活

5、作用。
　　最后利用人臍靜脈血內(nèi)皮細(xì)胞系(HUVECs)進(jìn)一步證實(shí)了MRTF-A對Integrins的調(diào)控作用。在HUVEC細(xì)胞中轉(zhuǎn)染siMRTF-A后再用VEGF處理。利用MTT檢測到干擾MRTF-A對細(xì)胞的增殖沒有顯著影響。鬼筆環(huán)肽染色、劃痕、transwell及matrigel實(shí)驗(yàn)證實(shí)低表達(dá)MRTF-A的細(xì)胞粘附、遷移和血管生成能力均下降，細(xì)胞遷移特異性標(biāo)志物MYL9和CYR61以及Integrins的表達(dá)降低。最后證實(shí)了M