體外誘導孤雌胚胎干細胞向生殖細胞分化.pdf

1、本文對體外誘導孤雌胚胎干細胞向生殖細胞分化問題進行了研究。隨著社會壓力的增加、環(huán)境的惡化，人類的生殖健康情況越來越引起人們的關注?，F(xiàn)實問題迫使許多女性選擇晚育，而女性的生殖能力隨著年齡的增長呈下降趨勢，因此人們對由卵巢衰老引起的疾病如不孕不育、胎兒的健康問題愈加重視。而卵子再生這一主題便成為了解決女性衰老的方法之一。同樣，配子發(fā)生及其調控機制的研究越加顯示出重要的醫(yī)學價值和深遠的社會意義。在小鼠中，未分化的生殖細胞前體被稱為原始生殖細胞

2、primordial germ cells(PGCs)。而精子和卵子都是由PGCs經(jīng)過減數(shù)分裂形成。胚胎干細胞最顯著的特征就是具有多能性。它能夠進行無限增殖并且能在體內和體外分化成三胚層的各種細胞類型，當移植到發(fā)育的囊胚中后可以發(fā)育成新生的個體。胚胎干細胞由于其具有的獨特性質和在生殖醫(yī)學等領域的巨大應用潛力而受到科學界的廣泛關注。將未受精的卵子激活后，從中分離的胚胎干細胞即為孤雌胚胎干細胞parthenogenetic embryo s

3、tem cells(pESC)。該細胞具有正常胚胎干細胞的所有特性，用該細胞誘導目的組織在理論上可以避免一些免疫排斥問題。由于該細胞來源于卵子，所以我們選擇它在體外進行卵子的誘導。RA是vitamin A的一種代謝產(chǎn)物。在胎兒的發(fā)育中RA對細胞的生長、分化以及衰老都起到作用。RA對體外誘導PGC的形成也有作用。Blimp1是PGC形成時最先表達的基因，我們先構建了blimp1-GFP的1116pES細胞系，通過用RA在體外誘導1116p

4、ES cell向PGC分化，對誘導過程中所形成的embryonicbody(EB)進行檢測時，并沒有看到blimp1表達的熒光，但PGC形成的晚期基因mvh和dazl的表達量上升很多倍。但減數(shù)分裂早期的基因如sycp3的表達量并沒有上升。說明此時的EB可能處于PGC晚期階段，接下來將該EB通過卵巢注射或者腎包囊移植到體內進一步檢測。結果發(fā)現(xiàn)在注射由RA誘導下形成的EB的卵巢切片中有許多類似卵泡狀的東西，但這些是否是真正的卵泡、是否由所注