人胚胎干細(xì)胞向子宮內(nèi)膜樣細(xì)胞的誘導(dǎo)分化.pdf

1、育齡期女性的子宮內(nèi)膜正常情況下在月經(jīng)周期隨雌激素、孕激素的影響呈現(xiàn)增殖期、分泌期交替的現(xiàn)象。但是由于先天因素、病理因素或人工因素對(duì)子宮內(nèi)膜的破壞和損傷，造成部分育齡期女性的子宮內(nèi)膜始終過(guò)薄，稱之為薄型子宮內(nèi)膜，影響胚胎著床，在輔助生殖技術(shù)中尤其常見(jiàn)。
　　目前，改善薄型子宮內(nèi)膜的方法有多種:藥物治療、手術(shù)治療、干細(xì)胞移植等。其中藥物治療較為常用，且效果得到了大家的肯定，手術(shù)治療也在一定程度上可以解決部分患者的薄型子宮內(nèi)膜的問(wèn)題，但

2、干細(xì)胞移植目前尚處于研究階段，未應(yīng)用于臨床。研究顯示成體干細(xì)胞可在體外培養(yǎng)條件下向子宮內(nèi)膜細(xì)胞誘導(dǎo)分化，也有學(xué)者將成體干細(xì)胞移植入薄型子宮內(nèi)膜鼠模型體內(nèi)，觀察到了子宮內(nèi)膜的改善。本實(shí)驗(yàn)依托鄭州大學(xué)第一附屬醫(yī)院生殖醫(yī)學(xué)中心這一平臺(tái)，有獲取胚胎干細(xì)胞的便利條件，通過(guò)摸索胚胎干細(xì)胞向子宮內(nèi)膜細(xì)胞誘導(dǎo)分化條件，為治療薄型子宮內(nèi)膜打下實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。
　　目的：
　　摸索人胚胎干細(xì)胞向子宮內(nèi)膜樣細(xì)胞誘導(dǎo)分化條件，比較不同誘導(dǎo)方案的優(yōu)劣。

3、r>　　方法：
　　1.采用不同的手術(shù)方式獲取子宮內(nèi)膜，分別經(jīng)過(guò)分離、培養(yǎng)、純化、鑒定，將獲得的子宮內(nèi)膜基質(zhì)細(xì)胞凍存?zhèn)溆?。分析子宮內(nèi)膜組織來(lái)源是否影響子宮內(nèi)膜基質(zhì)細(xì)胞的獲取。
　　2.本實(shí)驗(yàn)室已成功建系并經(jīng)過(guò)鑒定的人胚胎干細(xì)胞體外培養(yǎng)、傳代擴(kuò)增，供誘導(dǎo)分化用。
　　3.按照誘導(dǎo)分化條件的不同，將實(shí)驗(yàn)對(duì)象分為3組:自發(fā)分化組、單純誘導(dǎo)分化組、共培養(yǎng)分化組。誘導(dǎo)分化分為2個(gè)階段。
　　4.分析誘導(dǎo)分化終末階段3組細(xì)胞

4、角蛋白、波形蛋白表達(dá)情況（免疫熒光法），采用RT-PCR法驗(yàn)證誘導(dǎo)分化終末階段細(xì)胞的基因表達(dá)。
　　結(jié)果：
　　1.子宮內(nèi)膜診刮來(lái)源的子宮內(nèi)膜組織來(lái)獲得較多量的子宮內(nèi)膜基質(zhì)細(xì)胞。
　　2.誘導(dǎo)分化過(guò)程中，克隆形態(tài)隨誘導(dǎo)分化的時(shí)間發(fā)生改變。
　　3.誘導(dǎo)分化終末階段，免疫熒光鑒定顯示:共培養(yǎng)誘導(dǎo)分化組、單純誘導(dǎo)分化組角蛋白表達(dá)陽(yáng)性，波形蛋白表達(dá)陰性;自發(fā)分化組角蛋白及波形蛋白表達(dá)均陽(yáng)性。對(duì)3組角蛋白表達(dá)的平均免疫熒

5、光強(qiáng)度進(jìn)行分析，3組間平均免疫熒光強(qiáng)度差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，再進(jìn)行兩兩比較，共培養(yǎng)分化組與單純誘導(dǎo)分化組、自發(fā)分化組差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，單純誘導(dǎo)分化組與自發(fā)分化組差異無(wú)明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＞0.05)。RT-PCR結(jié)果顯示角蛋白基因表達(dá)陽(yáng)性，Hoxa10及雌激素受體(estrogen receptor，ER)基因未見(jiàn)明顯條帶。
　　結(jié)論：
　　1.子宮內(nèi)膜組織量影響子宮內(nèi)膜基質(zhì)細(xì)胞的獲得。