細胞低氧培養(yǎng)系統(tǒng)的研制及人胸腺瘤細胞系的建立.pdf

1、腫瘤組織內低氧是腫瘤生長微環(huán)境的主要特征。雖然國外有成熟的低氧培養(yǎng)箱銷售，但由于價格昂貴，使其廣泛應用受到限制，國內一些研究人員也建立了很多低氧培養(yǎng)模型，但大多需要手工操作，且不能實時監(jiān)測培養(yǎng)艙內氧濃度的變化。因此我們利用單片機技術，開發(fā)細胞低氧培養(yǎng)系統(tǒng)，實現(xiàn)對培養(yǎng)系統(tǒng)的氧濃度實時監(jiān)測及嚴格控制，為細胞低氧的研究提供了穩(wěn)定的系統(tǒng)。應用PIC16F877單片機作為控制器，通過單片機內置AD模塊利用逐次逼近法計算輸入的模擬量，并將相應電平信

2、號發(fā)送到繼電器，換成標準電壓后控制氧氣和氮氣鋼瓶的電磁閥開閉，維持培養(yǎng)系統(tǒng)內恒定的氧濃度。通過單片機的控制，建立的低氧培養(yǎng)系統(tǒng)可獲得0％～95%任意氧濃度，可滿足細胞對不同低氧濃度實驗的要求。
　　本研究利用此低氧培養(yǎng)系統(tǒng)，檢測了胸腺瘤細胞系在低氧狀態(tài)下的部分指標。目前，國內外胸腺瘤伴重癥肌無力患者的胸腺瘤細胞系還未見報道，為此，我們從胸腺瘤伴重癥肌無力手術患者中，取胸腺瘤組織進行原代培養(yǎng)，探討人胸腺瘤組織原代培養(yǎng)的方法，明確胸腺

3、瘤組織和胸腺瘤細胞系在體外生長的最佳條件和最適培養(yǎng)基。原代培養(yǎng)成功后，通過各種方法純化和穩(wěn)定傳代建立一株人胸腺瘤細胞系，命名為Thy0517，為胸腺瘤發(fā)病的分子基礎及胸腺瘤與重癥肌無力的信號傳導關系的研究提供了穩(wěn)定的細胞模型。應用免疫組織化學和免疫細胞化學方法鑒定細胞系來源，倒置顯微鏡觀察此細胞系的生長特征，測定細胞倍增時間，HE染色觀察細胞內微細結構，秋水仙素法獲得細胞系染色體眾數(shù)及分布，分析體外裸鼠致瘤能力，并應用低氧培養(yǎng)系統(tǒng)檢測細