樹突狀細胞誘導胸腺上皮細胞系(MTEC-1)凋亡機制的體外研究.pdf

1、目的：體外研究證實樹突狀細胞可通過Notch受體與Jagged1配體轉(zhuǎn)導的信號誘導胸腺上皮細胞系(mouse thymic epithelial cell line1，MTEC-1)凋亡，為治療嚴重感染、移植排斥反應和腫瘤的放化療等原因所引起的胸腺萎縮導致細胞免疫功能缺陷奠定基礎。
　　方法：分離骨髓細胞，體外采用GM-CSF和IL-4誘導分化為骨髓來源的樹突狀細胞(bone marrow derived dendritic ce

2、ll，BMDC)，然后經(jīng)LPS刺激促進其成熟，最后采用real-time PCR和流式細胞術(shù)分析BMDC的Jagged1表達水平;將成熟的BMDC與MTEC-1共培養(yǎng)，采用流式細胞術(shù)分析MTEC-1凋亡的變化，為進一步驗證Notch/Jagged1誘導胸腺上皮細胞凋亡，我們采用轉(zhuǎn)染Jagged1基因的成纖維細胞和重組Jagged1蛋白分別與MTEC-1共培養(yǎng)，再用流式細胞術(shù)檢測MTEC-1凋亡水平;最終應用γ分泌酶抑制劑DAPT阻斷信號

3、途徑來驗證Notch/Jagged1途徑是否參與DC誘導胸腺上皮細胞的凋亡。
　　結(jié)果：研究發(fā)現(xiàn)成熟的BMDC表面Notch配體Jagged1表達水平較不成熟的BMDC高;成熟的BMDC在體外與MTEC-1共培養(yǎng)后能明顯誘導MTEC-1的凋亡，進一步利用Jagged1轉(zhuǎn)基因的成纖維細胞或重組Jagged1蛋白與MTEC-1共培養(yǎng)，同樣證實了Notch/Jagged1信號能介導MTEC-1的凋亡;在相同的共培養(yǎng)體系中加入DAPT阻止