過表達Foxn1誘導人胚胎干細胞定向分化為胸腺上皮細胞的研究.pdf

1、自第一株人胚胎干細胞系成功建立以來，人胚胎干細胞(humanembryonic stem cells，hESCs)在再生醫(yī)學領域的應用前景受到越來越多研究者的關注。hESCs是一種具有向所有細胞分化的多分化潛能以及在體外無限擴增的自我更新能力的細胞，這些特性為細胞治療提供大量供體細胞帶來了很大的希望。胸腺是機體重要的中樞免疫器官，它不僅是哺乳動物T細胞發(fā)育分化和成熟的場所，而且還可以通過消除自體反應T細胞從而形成自身免疫耐受。胸腺機能障

2、礙將嚴重影響機體免疫功能，使機體免疫自穩(wěn)功能紊亂并伴發(fā)自身免疫性疾病。胸腺移植對免疫缺陷患者的治療具有很大的臨床意義，但是器官供體的短缺使得這一治療方法得不到廣泛應用。通過在體外將hESCs分化為胸腺上皮細胞可以建立一個胸腺上皮細胞的發(fā)育模型，并為細胞治療提供大量可移植的胸腺上皮細胞。
　　本課題通過在人胚胎干細胞中過表達轉錄因子Foxn1，觀察細胞形態(tài)變化并檢測標志基因的表達，成功地將其定向分化為胸腺上皮細胞。利用TALEN介導

3、的同源重組在人胚胎干細胞中敲入Foxn1-mCherry報告元件，使其能夠指示內(nèi)源Foxn1的表達。通過Tet-on誘導表達慢病毒系統(tǒng)在人胚胎干細胞系X-01中過表達Foxn1，發(fā)現(xiàn)人胚胎干細胞逐漸分化，細胞形態(tài)變扁平，細胞體積變大，表現(xiàn)出類似胸腺上皮細胞的形態(tài)。RT-PCR結果表明，過表達Foxn1后胸腺上皮細胞的標志基因Tbx1、Hoxa3、Eya1、K5、K8和內(nèi)源Foxn1的mRNA水平都顯著上調(diào)，并且隨著誘導時間的延長而增加，