銀杏內酯B誘導胚胎干細胞定向分化為心肌細胞的研究.pdf

1、目的：研究中藥成分銀杏內酯B可否在體外誘導胚胎干細胞定向分化為心肌細胞，為臨床干細胞移植治療心肌損傷性疾病提供實驗證據(jù)，旨在為干細胞生物資源的開發(fā)和我國傳統(tǒng)中藥新作用的開發(fā)提供理論依據(jù)。 方法：小鼠胚胎干細胞(embryonic stem cells，ESCs) 體外分化培養(yǎng)時采用經(jīng)典的懸滴、懸浮和貼壁“三步培養(yǎng)法”。在分化的同時加入不同終濃度的銀杏內酯B（10-5mol/L、10-4mol/L、10-3mol/L）誘導分化。倒

2、置顯微鏡下觀察分化細胞的形態(tài)特征、觀察擬胚體（embryonic bodies，Ebs）的大小變化、觀察胚體的跳動頻率、記錄跳動胚體及總胚體的個數(shù)；用免疫細胞化學技術檢測心肌特異的α-肌節(jié)型肌動蛋白（α-sarcomeric actin）；利用流式細胞儀檢測分化心肌細胞的比率。 結果：（1）在倒置顯微鏡下可觀察到分化的心肌樣細胞于分化第8天出現(xiàn)自發(fā)性節(jié)律性收縮，到分化第13-14天自發(fā)性節(jié)律性收縮擬胚體比率達到高峰，隨后自發(fā)性節(jié)

3、律性收縮擬胚體比率降低。不同濃度組銀杏內酯B 誘導胚胎干細胞定向分化的心肌樣細胞跳動頻率和對照組比較均無顯著性差異（p>0.05）。（2）被銀杏內酯B 誘導后，大多數(shù)的ESCs 能分化為心肌樣細胞，這些細胞中的α-肌節(jié)型肌動蛋白（α-sarcomeric actin）染色呈陽性。（3）銀杏內酯B 誘導胚胎干細胞分化為心肌樣細胞的有效濃度是10-4mol/L，和對照組比較有顯著性差異（p<0.05）。 結論：（1）銀杏內酯B不能改