應(yīng)用人胚胎干細(xì)胞分化的心肌細(xì)胞進(jìn)行心臟毒性評(píng)價(jià)方法的研究.pdf

1、研究選用DOX、IMA、ISO、VER分別與hESC-CM孵育，應(yīng)用標(biāo)準(zhǔn)的全細(xì)胞膜片鉗技術(shù)記錄各實(shí)驗(yàn)組心肌細(xì)胞動(dòng)作電位、hERG鉀電流、Nav1.5電流、以及L-Ca2+電流在給藥前后的變化，建立人胚胎干細(xì)胞分化的心肌細(xì)胞心臟電生理功能評(píng)價(jià)模型。結(jié)果顯示：①DOX對(duì)hESC-CM動(dòng)作電位時(shí)程（Action Potential Duration， APD）有輕微的縮短作用，減小動(dòng)作電位振幅（Action Potential Amplitu

2、de，APA）、降低靜息電位（Resting Potential，RP），以上作用隨DOX濃度的增加而增強(qiáng)；DOX對(duì)動(dòng)作電位0相除極速率(Max dv/dt)、Nav1.5電流、L-Ca2+電流及hERG電流無明顯作用；②IMA對(duì)hESC-CM的Nav1.5電流有強(qiáng)烈的抑制作用，IC50低至2.00±0.49μmol·L-1；對(duì)L-Ca2+電流具有抑制作用，IC50為23.4±9.8μmol·L-1；對(duì)hERG電流無明顯作用；細(xì)胞的AP

3、A、APD50、APD90隨IMA濃度增加而縮短，提示IMA可縮短細(xì)胞動(dòng)作電位時(shí)程，分析該作用可能與它對(duì) Nav1.5、L-Ca2+的抑制作用有關(guān)；③ISO對(duì)hESC-CM的Nav1.5電流抑制作用較小，IC50大于100μmol·L-1；但對(duì)L-Ca2+電流具有激活作用，可增強(qiáng)L-Ca2+電流，除此之外，ISO還可抑制hERG電流；ISO對(duì)細(xì)胞的動(dòng)作電位無明顯作用；④VER對(duì)Nav1.5電流有抑制作用，IC50為47.3±5.4μmo

4、l·L-1；對(duì)L-Ca2+電流有強(qiáng)烈的抑制作用，使其迅速降低，IC50為7.1±1.5μmol·L-1；對(duì)hERG電流有明顯的抑制作用，IC50為3.5±1.0μmol·L-1；APD50、APD90、APA、RP以及動(dòng)作電位Max dv/d隨VER濃度的增加而受到VER的抑制；以上結(jié)果提示VER具有多離子通道抑制作用，明顯影響hESC-CM的電生理功能。
　　本研究分別建立了應(yīng)用人胚胎干細(xì)胞分化的心肌細(xì)胞進(jìn)行細(xì)胞功能和電生理功能