心鈉素對小鼠胚胎干細胞分化的心肌細胞L型鈣通道的調(diào)控.pdf

1、目的: L型鈣通道是電壓門控離子通道,在動作電位的平臺期參與心肌細胞外鈣內(nèi)流,并在心肌收縮偶聯(lián)過程中起重要作用.心鈉素是心臟分泌的一種多肽,其可下調(diào)L型鈣電流,但作用機制還不清楚.本文旨在探索心鈉素對小鼠胚胎干細胞分化的心肌細胞L型鈣電流的調(diào)控機制. 方法:應(yīng)用胚胎干細胞懸滴培養(yǎng)的方法誘導(dǎo)分化為心肌細胞,利用膠原酶Ⅱ消化法獲得不同時期的單個跳動的心肌細胞:利用全細胞膜片鉗技術(shù),記錄心鈉素刺激下心肌細胞的L型鈣電流及相關(guān)信號通道的

2、抑制劑或激活劑對L型鈣電流的調(diào)控.免疫熒光法測細胞中特異蛋白ANP和肌球蛋白MHC表達;檢測不同時期小鼠胚胎心臟中ANP表達水平. 結(jié)果:利用懸滴法培養(yǎng)小鼠胚胎干細胞并分化為跳動的EB,酶消化得到了單個跳動的心肌細胞,免疫熒光檢測到心肌特異的a-MHC表達,并且在早期ESMC中檢測到心肌細胞動作電位和鈣電流. ANP在EDS和LDS心肌細胞中對動作電位有顯著負變時效應(yīng),并且能夠降低EDS和LDS心肌細胞的基礎(chǔ)的和Iso激活的

3、L型鈣電流.ANP降低I<,Lcal>途徑,獨立于NO途徑、PTX敏感的G蛋白(Go,Gi)和可溶性GC.ANP對I<,Lcal>的抑制是通過其受體激活了顆粒性GC、cGMP依賴的PDEⅡ途徑,PDEⅡ水解cAMP導(dǎo)致其濃度降低,減少了其調(diào)控的鈣通道開放頻率. RT-PCR結(jié)果顯示在胚胎發(fā)育過程中ANP的表達持續(xù)升高,并且在8天胚胎中已經(jīng)表達,第12天ANP強烈表達,隨后ANP表達基本沒變化,但是出生后分泌增多,成體后表達量降低.