體外誘導小鼠胚胎干細胞為肝臟及心肌細胞的實驗研究.pdf

1、本研究旨在通過優(yōu)化ES細胞培養(yǎng)條件,首先模擬肝臟體內(nèi)分化發(fā)育,分階段、定向誘導E14小鼠ES細胞分化為肝細胞,從形態(tài)學、特異性基因表達和功能測定三個水平對誘導細胞進行分析、鑒定.在此基礎上,對誘導肝細胞進行凝血因子Ⅷ、Ⅸ表達格局分析.這無論在研究構(gòu)思上還是在ES細胞定向誘導分化研究方面均屬新的嘗試,本研究將為血友病的細胞替代治療研究提供新的思路和供體細胞來源.同時,我們擬進行小鼠ES細胞誘導為心肌細胞的研究,目前有關小鼠ES細胞分化為心

2、肌細胞的研究報道,基本是在未添加任何因子條件下,進行體外分化培養(yǎng),誘導小鼠ES細胞形成具有自發(fā)性節(jié)律收縮的心肌細胞.但是有學者發(fā)現(xiàn),雖然在未添加生長因子情況下進行分化培養(yǎng),ES細胞可以自發(fā)分化為多種類型細胞,包括自發(fā)節(jié)律收縮的心肌細胞;而若有生長因子存在,則可以產(chǎn)生數(shù)量更多的、高度分化且類型均一的特定細胞.因此,本研究嘗試將酸性成纖維細胞生長因子(acidic fibroblast growth factor,aFGF)和肝細胞生長因子

3、(hepatocyte growth factor,HGF)作為刺激因子,體外分階段、定向誘導E14小鼠ES細胞分化為心肌細胞,希望獲得更多的、分化均一的心肌細胞.本研究無論對于ES細胞誘導分化研究,還是獲得豐富的供體細胞來源用于細胞替代治療,都具有十分重要的研究和應用意義.本研究方案包括:一、小鼠ES細胞的培養(yǎng)、鑒定與優(yōu)化二、體外定向誘導E14小鼠ES細胞為肝臟細胞及其凝血因子格局分析三、體外定向誘導E14小鼠ES細胞為具有節(jié)律性收縮