無(wú)滋養(yǎng)層無(wú)血清體系下人胚胎干細(xì)胞定向誘導(dǎo)分化視網(wǎng)膜色素上皮細(xì)胞.pdf

1、視網(wǎng)膜色素上皮細(xì)胞（Retinal pigmented epithelium, RPE）的功能紊亂、變性和凋亡可造成視網(wǎng)膜內(nèi)環(huán)境的惡化，進(jìn)而引起光感細(xì)胞的凋亡，最終導(dǎo)致退行性視網(wǎng)膜疾病的發(fā)生，使患者視力下降，甚至失明。但迄今為止，依然沒(méi)有有效的治療手段來(lái)治愈這些疾病。而近期臨床試驗(yàn)表明，細(xì)胞治療有望成為該類(lèi)退行性視網(wǎng)膜疾病的治療方法。其中，人胚胎干細(xì)胞（Human embryonic stem cell, hESCs）是一類(lèi)能無(wú)限增殖和

2、分化成所有三胚層細(xì)胞的細(xì)胞群體，而hESCs誘導(dǎo)分化獲得的RPE（hESCs-RPE）被認(rèn)為是細(xì)胞移植治療的最佳種子細(xì)胞。并且動(dòng)物模型實(shí)驗(yàn)和臨床試驗(yàn)結(jié)果顯示，hESCs-RPE在體內(nèi)具有很好的安全性，不存在致瘤和引起其它不良反應(yīng)的風(fēng)險(xiǎn)，并且對(duì)視力的恢復(fù)具有一定的效果。但是，現(xiàn)有的hESCs-RPE培養(yǎng)體系，往往使用滋養(yǎng)層（feeder）和含有胎牛血清（Fetal calf serum, FBS）等動(dòng)物源性或成分不明確成份。為hESCs-

3、RPE的臨床應(yīng)用帶來(lái)了污染的潛在風(fēng)險(xiǎn)和高昂的培養(yǎng)成本。而建立無(wú)動(dòng)物源性培養(yǎng)體系，將有利于人們對(duì)RPE生長(zhǎng)機(jī)制的研究和今后對(duì)hESCs-RPE相關(guān)細(xì)胞制劑的規(guī)?；?、商品化生產(chǎn)。
　　本文通過(guò)無(wú)滋養(yǎng)層feeder、無(wú)血清體系培養(yǎng)的hESCs。并利用免疫熒光染色，核型分析，流式細(xì)胞儀等技術(shù)手段檢測(cè) hESCs的形態(tài)與多能性表達(dá)情況。hESCs經(jīng)過(guò)7天的培養(yǎng)后，克隆塊基本融合。此時(shí)，將原有的hESCs培養(yǎng)液更換為RPE分化培養(yǎng)液，利用自分