人骨肉瘤細(xì)胞系與人正常成骨細(xì)胞系的比較蛋白質(zhì)組學(xué)的研究.pdf

1、目的：對(duì)人骨肉瘤細(xì)胞系與人正常成骨細(xì)胞系的總蛋白質(zhì)進(jìn)行比較蛋白質(zhì)組學(xué)的研究。
　　方法：通過(guò)對(duì)人骨肉瘤細(xì)胞系MG-63與人正常成骨細(xì)胞系hFOB1.19的體外培養(yǎng)后提取總蛋白進(jìn)行雙向電泳,篩選兩者差異蛋白質(zhì),利用基質(zhì)輔助激光解吸電離飛行時(shí)間質(zhì)譜(MALDI-TOF/TOFMS)鑒定相關(guān)蛋白質(zhì),再利用經(jīng)典分子生物學(xué)方法(western-blot)進(jìn)行體內(nèi)驗(yàn)證,檢測(cè)波形蛋白在人骨肉瘤組織中的表達(dá)量。
　　結(jié)果：1.二維凝膠電泳分

2、離顯示兩組間差異存在2倍及以上的蛋白點(diǎn)有73個(gè),其中上調(diào)的蛋白點(diǎn)有50個(gè),下調(diào)的差異蛋白點(diǎn)有23個(gè),選擇其中差異較顯著的12個(gè)點(diǎn)行MALDI-TOF/TOFMS質(zhì)譜分析,共檢測(cè)出8種蛋白,其中通過(guò)質(zhì)譜分析的結(jié)果和生物信息學(xué)的分析波形蛋白可能為骨肉瘤發(fā)生發(fā)展的蛋白結(jié)點(diǎn),并用分子生物學(xué)方法western-blot給予體內(nèi)驗(yàn)證。2.體外培養(yǎng)細(xì)胞系與人體組織存在差異性,因此由體外細(xì)胞系分離得出的蛋白質(zhì)組學(xué)的結(jié)果需要在人體內(nèi)組織標(biāo)本中進(jìn)行驗(yàn)證。對(duì)

3、骨肉瘤組織和癌旁組織進(jìn)行western-blot體內(nèi)驗(yàn)證,分析波形蛋白在骨肉瘤組織組(n=7)和癌旁組織對(duì)照組(n=7)中的表達(dá),采用兩樣本t檢驗(yàn)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析,骨肉瘤標(biāo)本中波形蛋白的表達(dá)強(qiáng)度顯著高于對(duì)照組。
　　結(jié)論：本課題嘗試?yán)秒p向電泳技術(shù)、基質(zhì)輔助激光解吸電離飛行時(shí)間質(zhì)譜鑒定技術(shù)相結(jié)合的方法研究人類(lèi)骨肉瘤細(xì)胞系與正常成骨細(xì)胞系蛋白質(zhì)組之間的差異,并對(duì)差異蛋白波形蛋白進(jìn)行了western-blot體內(nèi)驗(yàn)證,得出結(jié)論如下:

4、r>　　1.經(jīng)雙向電泳技術(shù)及基質(zhì)輔助激光解吸電離飛行時(shí)間質(zhì)譜鑒定技術(shù)的聯(lián)合應(yīng)用可實(shí)現(xiàn)人類(lèi)骨肉瘤細(xì)胞系與人正常成骨細(xì)胞系差異蛋白質(zhì)的鑒定,這些蛋白質(zhì)可能參與了細(xì)胞內(nèi)外物質(zhì)交換、細(xì)胞識(shí)別、代謝調(diào)節(jié)、免疫應(yīng)答等重要生物學(xué)活動(dòng)。
　　2.對(duì)差異蛋白波形蛋白進(jìn)行western-blot體內(nèi)驗(yàn)證,得到了與基質(zhì)輔助激光解吸電離飛行時(shí)間質(zhì)譜分析一致的結(jié)果,說(shuō)明了我們對(duì)人骨肉瘤細(xì)胞系與人正常成骨細(xì)胞系的比較蛋白質(zhì)組學(xué)的研究結(jié)果可信,波形蛋白在人骨肉