人肝癌細(xì)胞系轉(zhuǎn)移相關(guān)分子的比較蛋白質(zhì)組學(xué)研究.pdf

1、復(fù)旦大學(xué)博士學(xué)位論文人肝癌細(xì)胞系轉(zhuǎn)移相關(guān)分子的比較蛋白質(zhì)組學(xué)研究姓名：崔杰峰申請學(xué)位級別：博士專業(yè)：生物化學(xué)與分子生物學(xué)指導(dǎo)教師：劉銀坤20040428博士論文人肝癌細(xì)胞系轉(zhuǎn)移相關(guān)分子的比較蛋白質(zhì)組學(xué)研究尿素，n=3)’781一34個(8M尿素，n：3)。上述結(jié)果表明離液劑濃度改變對蛋白斑點(diǎn)的獲得影響較大。不同固定時間(雙胺銀染法)影響蛋白質(zhì)條帶的顯示，固定方式A(40％乙醇10％乙酸固定1h，后5％乙醇5％乙酸固定過夜)條帶顯示最多；

2、固定方式B(40％乙醇10％乙酸固定lh。)條帶顯示次之；固定方式C(5％乙醇5％乙酸固定過夜)條帶顯示最少。固定方式A得到的蛋白質(zhì)銀染圖譜理想，建議用于蛋白成分復(fù)雜圖譜的顯示。3種轉(zhuǎn)移潛能不同人肝癌細(xì)胞系的蛋白質(zhì)樣品，在相同條件下分別進(jìn)行3次雙向電泳，Hep3B平均檢測到976112個蛋白點(diǎn)(n=3)，MHCC97L平均檢測到109240個蛋白點(diǎn)(n=3)，MHCC97H平均檢測到88815個蛋白點(diǎn)(n=3)，以其中點(diǎn)數(shù)最多的一塊MH

3、CC97L圖譜作為參考膠，Hep3B與其匹配的平均匹配點(diǎn)數(shù)為63737個(n=3)，MHCC97L與其匹配的平均匹配點(diǎn)數(shù)為77116個(n=2)，MHCC97H與其匹配的平均匹配點(diǎn)數(shù)為58951個(n=3)，平均匹配率分別為657％，721％，662％。不同膠間蛋白質(zhì)斑點(diǎn)的位置偏差I(lǐng)EF(等電聚焦)方向為295095mm，SDS—PAGE方向為2870。88mm。Hep3B、MHCC97L、MHCC97H中有359個蛋白質(zhì)點(diǎn)匹配。與He

4、p3B比，MHCC97L有103個點(diǎn)未匹配，相差10倍以上的上調(diào)點(diǎn)有57個，相差10倍以上的下調(diào)點(diǎn)有49個；MHCC97H有113個點(diǎn)未匹配，相差10倍以上的上調(diào)點(diǎn)有47個，相差10倍以上的下調(diào)點(diǎn)有52個。質(zhì)譜鑒定出SIOOA4，SIOOA6，SIOOAll，annexin1等26種膠內(nèi)差異蛋白質(zhì)。部分差異蛋白如annexinl和$100A4等在轉(zhuǎn)移與不轉(zhuǎn)移人肝癌細(xì)胞系中為最新發(fā)現(xiàn)。由于轉(zhuǎn)移性肝癌細(xì)胞系全蛋白質(zhì)表達(dá)譜與不轉(zhuǎn)移人肝癌細(xì)胞系

5、比差異明顯，推測肝癌侵襲轉(zhuǎn)移性與細(xì)胞內(nèi)多種差異蛋白的改變相關(guān)。第二部分轉(zhuǎn)移潛能不同人肝癌細(xì)胞系差異蛋白的再驗證及功能分析對差異蛋白annexinl和$100A4的功能解析是本研究的另一個重要目標(biāo)。由于兩種差異蛋白是從轉(zhuǎn)移與不轉(zhuǎn)移的人肝癌細(xì)胞系蛋白質(zhì)表達(dá)譜的差異比較中篩選出來的，因此一系列與侵襲轉(zhuǎn)移有關(guān)的細(xì)胞生物學(xué)功能的檢測成為課題的重點(diǎn)。為保證差異蛋白初篩結(jié)果的可信及下游分析的確定性，我們首先對差異蛋白結(jié)果進(jìn)行了再驗證，應(yīng)用RT—PCR