萊菔素抗肝癌細(xì)胞蛋白質(zhì)組學(xué)研究.pdf

1、十字花科植物如萊菔子已在中藥史上有很長(zhǎng)的用藥記載，它可以作為抗癌和抗炎功效的藥物。萊菔素是提取自萊菔子的天然異硫氰酸酯成分，萊菔素的存在與萊菔子具有抗癌活性密切相關(guān)。盡管如此，萊菔素能殺死癌細(xì)胞的機(jī)制尚未研究清楚。在本課題的研究中，萊菔素的一種抗肝癌機(jī)制被闡明。主要研究結(jié)論如下:
　　1、萊菔素對(duì)肝癌HepG2和SMMC7721細(xì)胞以濃度和時(shí)間依賴的方式產(chǎn)生一定的細(xì)胞毒性。為了驗(yàn)證萊菔素抑制癌細(xì)胞生長(zhǎng)是由于誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡，采用流式細(xì)

2、胞儀測(cè)定萊菔素作用肝癌細(xì)胞誘導(dǎo)凋亡的情況?？隙巳R菔素對(duì)肝癌的作用效果。
　　2、建立了高質(zhì)量、穩(wěn)定且重復(fù)性高的肝癌HepG2細(xì)胞系總蛋白質(zhì)二維電泳分離技術(shù)實(shí)驗(yàn)條件。結(jié)論為:HepG2細(xì)胞蛋白經(jīng)過(guò)水化液選擇含有7M尿素和2M硫脲的配方裂解，超濾離心方法除鹽，運(yùn)用Bradford法進(jìn)行蛋白質(zhì)定量，一向等點(diǎn)聚焦IPG膠條為17 cm、pH3-10非線性，聚焦90000伏小時(shí)，二向SDS-PAGE膠濃度選擇10％，染色方法為銀染。

3、>　　3、在蛋白質(zhì)組學(xué)的研究基礎(chǔ)下，我們首次發(fā)現(xiàn)KRT8是萊菔素抗肝癌的靶標(biāo)。萊菔素抑制KRT8和KRT18的表達(dá)可以激活Fas死亡受體信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路并且使肝癌細(xì)胞發(fā)生失巢凋亡。
　　4、在數(shù)量繁多的中間絲狀蛋白家族中，KRT8和KRT18在上皮細(xì)胞中可以抵抗幾種造成細(xì)胞死亡的壓力，而且KRT8和KRT18的減少在Fas誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡過(guò)程中有很重要的作用。與此一致，我們發(fā)現(xiàn)萊菔素處理肝癌細(xì)胞或者RNA干擾都可以抑制KRT8和KRT1