文蛤活性多肽對肝癌細(xì)胞SMMC-7721效應(yīng)的差異蛋白質(zhì)組研究.pdf

1、文蛤(學(xué)名：Meretrix Meretrix Linnaeus，英又名：Hard clam)不僅肉質(zhì)鮮美、營養(yǎng)豐富，而且具有很高的藥用價值。據(jù)報道文蛤具有抗癌、降血糖、降血脂和抗氧化等活性。許多研究者已對文蛤抗癌活性做了研究，證實文蛤提取物具有較強的抗癌活性。 將文蛤肉勻漿、抽提，并通過G-25凝膠層析柱分離，得到具有抑癌活性的組分，初步判斷為肽類物質(zhì)。該組分在濃度為0.5μg/mL時對肝癌細(xì)胞SMMC-7721的抑制率能達(dá)到

2、50.6％。通過光學(xué)顯微鏡觀察，可以發(fā)現(xiàn)肝癌細(xì)胞在文蛤提取物作用后形態(tài)發(fā)生很大變化。 利用蛋白質(zhì)組學(xué)手段研究文蛤活性多肽對肝癌細(xì)胞的作用有助于更好地研究該物質(zhì)抑制肝癌細(xì)胞的機制，為后續(xù)的研究提供理論基礎(chǔ)。 通過雙向電泳技術(shù)的建立以及初步優(yōu)化對一些環(huán)節(jié)如樣品處理的方法、上樣量的選擇、電泳參數(shù)的設(shè)置、凝膠濃度和SDS凝膠電泳染色方法等進行了優(yōu)化得到了分辨率較好的肝癌細(xì)胞SMMC-7721的蛋白圖譜。進一步通過2D軟件分析圖譜

3、，確定差異點。進行膠內(nèi)酶解并對酶解條件進行了優(yōu)化。利用MALDI-TOF質(zhì)譜儀進行質(zhì)譜分析。最后利用質(zhì)譜數(shù)據(jù)在網(wǎng)上進行檢索鑒定差異蛋白質(zhì)。 通過圖譜分析找到136個差異蛋白其中96個蛋白表達(dá)下調(diào)，40個蛋白表達(dá)上調(diào)。對其中差異較明顯的點進行了鑒定，最終鑒定出10種差異蛋白。其中6個蛋白表達(dá)下調(diào)，3個蛋白表達(dá)上調(diào)。另有一個蛋白等電點發(fā)生了變化。這些差異蛋白中有分子伴侶蛋白、細(xì)胞骨架蛋白、鋅指蛋白、代謝相關(guān)蛋白、調(diào)控蛋白等。可見細(xì)胞