文蛤活性多肽對(duì)肝癌細(xì)胞SMMC-7721效應(yīng)的差異蛋白質(zhì)組研究.pdf

1、文蛤(學(xué)名：Meretrix Meretrix Linnaeus，英又名：Hard clam)不僅肉質(zhì)鮮美、營(yíng)養(yǎng)豐富，而且具有很高的藥用價(jià)值。據(jù)報(bào)道文蛤具有抗癌、降血糖、降血脂和抗氧化等活性。許多研究者已對(duì)文蛤抗癌活性做了研究，證實(shí)文蛤提取物具有較強(qiáng)的抗癌活性。 將文蛤肉勻漿、抽提，并通過(guò)G-25凝膠層析柱分離，得到具有抑癌活性的組分，初步判斷為肽類物質(zhì)。該組分在濃度為0.5μg/mL時(shí)對(duì)肝癌細(xì)胞SMMC-7721的抑制率能達(dá)到

2、50.6％。通過(guò)光學(xué)顯微鏡觀察，可以發(fā)現(xiàn)肝癌細(xì)胞在文蛤提取物作用后形態(tài)發(fā)生很大變化。 利用蛋白質(zhì)組學(xué)手段研究文蛤活性多肽對(duì)肝癌細(xì)胞的作用有助于更好地研究該物質(zhì)抑制肝癌細(xì)胞的機(jī)制，為后續(xù)的研究提供理論基礎(chǔ)。 通過(guò)雙向電泳技術(shù)的建立以及初步優(yōu)化對(duì)一些環(huán)節(jié)如樣品處理的方法、上樣量的選擇、電泳參數(shù)的設(shè)置、凝膠濃度和SDS凝膠電泳染色方法等進(jìn)行了優(yōu)化得到了分辨率較好的肝癌細(xì)胞SMMC-7721的蛋白圖譜。進(jìn)一步通過(guò)2D軟件分析圖譜

3、，確定差異點(diǎn)。進(jìn)行膠內(nèi)酶解并對(duì)酶解條件進(jìn)行了優(yōu)化。利用MALDI-TOF質(zhì)譜儀進(jìn)行質(zhì)譜分析。最后利用質(zhì)譜數(shù)據(jù)在網(wǎng)上進(jìn)行檢索鑒定差異蛋白質(zhì)。 通過(guò)圖譜分析找到136個(gè)差異蛋白其中96個(gè)蛋白表達(dá)下調(diào)，40個(gè)蛋白表達(dá)上調(diào)。對(duì)其中差異較明顯的點(diǎn)進(jìn)行了鑒定，最終鑒定出10種差異蛋白。其中6個(gè)蛋白表達(dá)下調(diào)，3個(gè)蛋白表達(dá)上調(diào)。另有一個(gè)蛋白等電點(diǎn)發(fā)生了變化。這些差異蛋白中有分子伴侶蛋白、細(xì)胞骨架蛋白、鋅指蛋白、代謝相關(guān)蛋白、調(diào)控蛋白等?？梢?jiàn)細(xì)胞