鹽霉素誘導(dǎo)細(xì)胞自噬抑制人胃癌細(xì)胞系BGC823增殖.pdf

1、研究背景與目的：
　　 胃癌是世界上最常見的惡性腫瘤之一，目前無滿意的針對胃癌的輔助化療方案。在小鼠模型中發(fā)現(xiàn)鹽霉素具有特異性抑制乳腺癌干細(xì)胞生長及轉(zhuǎn)移的特性，但其抑制腫瘤細(xì)胞生長的潛在機(jī)制及對易耐藥胃癌細(xì)胞的影響尚無研究。細(xì)胞自噬參與多種化療藥物對腫瘤細(xì)胞的殺傷機(jī)制，本研究旨在研究鹽霉素通過誘導(dǎo)細(xì)胞自噬抑制胃癌細(xì)胞增殖。
　　 研究方法：
　　 應(yīng)用MTT法檢測鹽霉素對人胃癌細(xì)胞系BGC823的增殖抑制作用，應(yīng)

2、用倒置顯微鏡和Hoechst33258染色及LC3熒光抗體在熒光顯微鏡下觀察細(xì)胞形態(tài)及LC3表達(dá)情況，應(yīng)用流式細(xì)胞儀檢測鹽霉素對胃癌細(xì)胞凋亡率的影響及應(yīng)用3-MA抑制細(xì)胞自噬后細(xì)胞凋亡率變化情況，應(yīng)用Westernblotting檢測caspase-3、cleavedcaspase-3、caspase-7、cleavedcaspase-7、caspase-9、cleavedcaspase-9、PARP、cleaved-PARP、LC3的

3、表達(dá)水平，應(yīng)用透射電鏡觀察細(xì)胞自噬。
　　 研究結(jié)果：
　　 MTT法結(jié)果示鹽霉素對胃癌細(xì)胞BGC823的增殖抑制作用具有時間-劑量依賴性，24h、48h及72h鹽霉素作用人胃癌細(xì)胞BGC823的半數(shù)抑制濃度(IC50)分別是42.89μM、19.03μM、17.97μM。鹽霉素作用24h，倒置顯微鏡下觀察，細(xì)胞密度降低，大部分細(xì)胞變圓脫落，部分細(xì)胞固縮，碎裂。熒光顯微鏡下觀察，隨著鹽霉素作用時間延長，細(xì)胞質(zhì)內(nèi)紅色點(diǎn)狀熒

4、光增加。流式細(xì)胞檢測結(jié)果示不同濃度鹽霉素(0、7.5μM、30μM)處理24h，細(xì)胞凋亡率逐漸增加，但無統(tǒng)計學(xué)差異；抑制細(xì)胞自噬后，細(xì)胞凋亡率明顯降低。Westernblotting檢測示鹽霉素30μM作用12h后cleaved-PARP表達(dá)明顯上調(diào)，作用2h后即可見LC3Ⅰ轉(zhuǎn)變?yōu)長C3Ⅱ，未檢測到cleavedcaspase-3表達(dá)、cleavedcaspase-7及cleavedcaspase-9無明顯差異。透射電鏡見細(xì)胞質(zhì)內(nèi)自噬泡